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末端加A酶的介绍

发布日期:2018/12/6 13:35:24

介绍[1]

核酸扩增方法应用于分子生物学和重组DNA技术领域。这些方法用于增加特异核酸序列的拷贝数,这些特异核酸序列少量存在并常常存在于同时也存在有多种其他核酸序列(包括RNA和DNA)的环境中。使用核酸扩增方法尤其有助于核酸的检测和定量,其对于诊断例如传染病、遗传病和各种类型的癌症是重要的。核酸扩增方法也应用于其他领域,在这些领域中研究其中可能微量存在核酸的样品,例如法医学、考古学或者确定亲权。等温连续方法。

采用这些方法需要四种酶活性来完成扩增:依赖RNA的DNA聚合酶活性、依赖DNA地DNA聚合酶活性、RNA酶(H)活性和RNA 聚合酶活性。这些活性中的一些可以联合在一种酶中,所以通常只有 2或3种酶是必需的。依赖DNA的RNA聚合酶从含有可被RNA聚合酶识别的启动子 的DNA模板合成多重RNA拷贝。额外的核酸序列可以存在于目标序列的3′和5′末端。

可以通过将下列物质放在一起来开始扩增反应:来自起始材料的该核酸;适当的酶,这些酶一起提供上述的活性;和至少一种(但通常为两种)寡核苷酸。这些寡核苷酸中至少一种应当含有RNA聚合酶启动子的序列。虽然单链或双链DNA同样 可用作输入材料,但是如果输入材料为单链RNA,则基于转录的扩增方法就特别有用。

经过优化后的末端加A酶(A-Tailing Enzyme)可以有效地将dAMP掺入平末端DNA片段的3′端。3′-dA DNA产物在随后的连接步骤中可防止相互形成多聚体。用末端加A酶(A-Tailing Enzyme)模块加A尾的DNA可以连接到具有互补dT突出端的连接子或克隆载体上。末端加A酶可以将加A尾的DNA连接到具有互补dT突出端的连接子或克隆载体上。

主要参考资料

[1] CN02807706.7 用基于转录的扩增来扩增和检测DNA的方法