大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被大鼠雌三醇(E3)止抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入大鼠雌三醇(E3)校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗大鼠雌三醇(E3)（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中大鼠雌三醇(E3)的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中大鼠(E3)的浓度。

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒所需器材和试剂

1、酶标仪(波长450nm滤光片)

2、37°C恒温箱(不推荐使用细胞用CO2培养箱)

3、自动洗板机或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)

4、无菌的EP管及一次性吸头

5、精密的单道(0.5-10μL,5-50μL,20-200μL,200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校准)。

6、吸水纸及加样槽

7、去离子水或蒸馏水

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒标本收集:

1、收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2、血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。

3、标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

4、标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃,-70℃电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。

5、 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

操作步骤：

步骤1：向孔中加入100ul标准品或待测样品，贴上覆膜，37°C静置孵育90分钟。

洗板：洗板2次。不浸泡。

步骤2：加入100ul生物素-抗体工作液，贴上覆膜，37°C静置孵育60分钟。

洗板：洗板3次。每次浸泡1分钟。

步骤3：加入100ul HRP-链霉亲和素(SABC)工作液，贴上覆膜，37°C静置孵育30分钟。

洗板：洗板5次。每次浸泡1分钟。

步骤4：添加90ul TMB显色底物。贴上覆膜，37°C静置孵育10-20分钟(请使用TMB显色精准控制方法)。

步骤5：添加50ul反应终止液。立即在450nm处读取OD450值并计算。

注意事项：

1、使用不同的试剂盒时，需先做好标记，防止组分混用，导致实验失败。

2、试剂盒开启后，酶标板和标准品的保存条件请参考组件保存条件表格(受潮后活性会下降)。如发生使用或保存不当导致组件缺损，可申请购买配套组件(如E002冻干标准品)。

3、请使用无菌一次性吸头吸取试剂，使用后，须旋紧试剂瓶盖，以防止微生物污染和蒸发。

4、手工洗板时，加洗液的吸头或滴管，切勿接触酶标板孔。不充分的洗涤或污染容易造成假阳性和高背景。

5、检测过程中，请提前准备好下一步实验所需试剂，洗板后及时将试剂加入板孔，防止板孔干燥，导致检测失效。

6、在未经确认的情况下，请勿将其他批次试剂盒的试剂或其他来源的试剂用于本试剂盒。

7、请勿重复使用一次性吸头，以免造成交叉污染。

8、加样完成，贴覆膜以防孵育过程样品的蒸发，在推荐温度下完成孵育过程。

9、试验中请穿实验服、戴口罩、手套等，做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按生物试验室安全防护条例执行。

应用^[4][5]

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒可以用于低声压级水平次声对未孕大鼠卵巢及胚胎和仔鼠影响的研究

通过观察大鼠卵巢的结构及测定雌二醇（E2）、睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）的激素水平以探讨低声压级水平次声波（2～25Hz/70dB）短时间暴露对未孕SD大鼠卵巢功能的影响；通过测定雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平及记录仔鼠的数量、体质量、身长、尾长、出生时的存活率、3天存活率、性别比等相关指标以探讨低声压级水平次声波短时间暴露对孕鼠的胚胎和仔鼠的影响。

研究方法将40只SD雌性大鼠和6只SD雄性大鼠饲养两天适应后随机分组：实验1，对照组A1与低声压级水平次声处理组A2各8只，低声压级水平次声波处理方法为30分钟/次×2次/天×20天，于第21天麻醉解剖两组大鼠后取卵巢及血液并处理，卵巢组织经HE染色后在光学显微镜下观察其结构并通过放射免疫分析法测定血清中的雌二醇（E2）、睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）的激素水平；实验2，将24只雌鼠与6只雄鼠按4:1定时合笼，记录每只孕鼠妊娠时间，并将18只孕鼠随机分为对照组B1、妊娠期低声压级水平次声处理组B2（30分钟/次×2次/天×妊娠第1至20天）、妊娠中晚期低声压级水平次声处理组B3（30分钟/次×2次/天×妊娠第7至20天）各6只，分别于妊娠第6、12、18天经眼眶静脉采血并处理，通过大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒酶联免疫法测血清中的雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平，待孕鼠分娩后记录仔鼠的数量、身长、尾长、体质量、出生时存活率、3天存活率、性别比等相关指标。

大鼠雌三醇(E3)Elisa试剂盒结果实验1：对照组A1和低声压级水平次声处理组A2大鼠血清中雌二醇（E2）、睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）的激素水平的差异无统计学意义（P＞0.05）；与A1组相比，A2组卵泡的数量及形态无明显改变，但髓质层血管明显扩张。实验2：对照组B1、妊娠期低声压级水平次声处理组B2和妊娠中晚期低声压级水平次声处理组B3在不同孕期大鼠血清中雌三醇（E3）、孕酮（P）的激素水平的差异均无统计学意义（P＞0.05）；B1、B2及B3组仔鼠的数量、身长、尾长、出生存活率、3天存活率、性别比无明显差异（P＞0.05），与B1组相比，B2、B3组仔鼠的体质量明显增加（P＜0.05），B2与B3组仔鼠的体质量无明显差异（P＞0.05）。

参考文献

[1]Glial cell-expressed mechanosensitive channel TRPV4 mediates infrasound-induced neuronal impairment[J].Ming Shi;;Fang Du;;Yang Liu;;Li Li;;Jing Cai;;Guo-Feng Zhang;;Xiao-Fei Xu;;Tian Lin;;Hao-Ran Cheng;;Xue-Dong Liu;;Li-Ze Xiong;;Gang Zhao.Acta Neuropathologica,2013(5)

[2]Infrasound Sensitizes Human Glioblastoma Cells to Cisplatin-Induced Apoptosis[J].Kenneth Rachlin;;Dan H.Moore;;Garret Yount.Integrative Cancer Therapies,2013(6)

[3]Infrasound increases intracellular calcium concentration and inducesapoptosis in hippocampi of adult rats[J].Zhaohui Liu;;Li Gong;;Xiaofang Li;;Lin Ye;;Bin Wang;;Jing Liu;;Jianyong Qiu;;Huiduo Jiao;;Wendong Zhang;;Jingzao Chen;;Jiuping Wang.Molecular Medicine Reports,2012(1)

[4]Transmission of infrasonic pressure waves from cerebrospinal to intralabyrinthine fluids through the human cochlear aqueduct:Non-invasive measurements with otoacoustic emissions[J].Raghida Traboulsi;;Paul Avan.Hearing Research,2007(1)

[5]韩小雪.低声压级水平次声对未孕大鼠卵巢及胚胎和仔鼠影响的研究[D].暨南大学,2014.