L-乳酸脱氢酶的制备

概述^[1]

L-乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。L-乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于所有组织中。在动物或微生物体中，乳酸脱氢酶(简称“LDH”)是以NADH为辅酶，将丙酮酸经过生化反应生成乳酸，因此乳酸脱氢酶是乳酸菌发酵的关键酶。自然界中存在L和D两种依赖NADH的乳酸脱氢酶，分别催化丙酮酸生成L-乳酸和D-乳酸。在同时具有D-乳酸脱氢酶和L-乳酸脱氢酶的乳酸菌中，如果将D-乳酸脱氢酶缺失，就可以得到理论上光学纯度为100％的L-乳酸。L-乳酸脱氢酶广泛存在于微生物中，但目前只有少数乳杆菌属的L-乳酸脱氢酶基因被克隆和测序。

L-乳酸脱氢酶偏高的原因^[3]

至于L-乳酸脱氢酶高的原因，有以下方面:

1.当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时，部分肝细胞受损，血清中L-乳酸脱氢酶4和L-乳酸脱氢酶5含量就会有不同程度的增高。

2.乙肝治疗方法特别是是用药不当，长期服用同一种药物时造成肾毒现象的产生。当肾毒现象出现时，血清中L-乳酸脱氢酶含量会迅速升高。

3.乙肝不进行合适积极的治疗，发展到一定程度时会造成肝脏代谢严重异常，导致肾脏功能衰竭，从而也会引起L-乳酸脱氢酶含量升高。

4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会引起L-乳酸脱氢酶的偏高。

偏低的原因

L-乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。血清L-乳酸脱氢酶正常范围是100~300U/L，当出现乳酸脱氢酶偏低时，常见原因如下。

L-乳酸脱氢酶偏低的原因1:检查过程中出现误差;

L-乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失调;

L-乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不好等。

总之，L-乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了。因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会引起乳酸脱氢酶的偏高。

制备^[2]

于1mL离心管中加入300μL菌悬液(30mg湿菌体)和250μL磷酸钠缓冲液(pH7.0)，37℃保温5min，再依次加入50μL葡萄糖(终浓度50mmol/L)和400μL苯丙酮酸(终浓度10mmol/L)，反应1h后，取200μL反应液加入800μL甲醇终止反应，过0.22μm有机滤膜，进行HPLC分析；另取200μL反应液，用1mL乙酸乙酯进行萃取，上层有机相经无水硫酸钠干燥后过0.22μm有机滤膜，进行对映选择性分析。结果显示，当体系反应40min后，L-PLA的浓度为5.62mmol/L，产率为56.2％，eep>99％，当反应80min后，苯丙酮酸完全被消耗，产生8.59mmol/L的L-乳酸脱氢酶，产率为85.9％，eep>99％。

主要参考资料

[1] 黄彦, 韦宇拓, 张黎, 陈发忠, & 黄日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 应用与环境生物学报(1), 70-73.

[2] 黄彦, 韦宇拓, 张黎, 陈发忠, & 黄日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 应用与环境生物学报(1), 70-73.

[3] 杨寿钧, & 蔡妙英. . 嗜热菌的耐热l—乳酸脱氢酶的研究. 微生物学报, 031(6), 438-442.