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L-乳酸脱氢酶的制备

发布日期:2020/3/24 14:32:26

概述[1]

L-乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。L-乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶,几乎存在于所有组织中。在动物或微生物体中,乳酸脱氢酶(简称“LDH”)是以NADH为辅酶,将丙酮酸经过生化反应生成乳酸,因此乳酸脱氢酶是乳酸菌发酵的关键酶。自然界中存在L和D两种依赖NADH的乳酸脱氢酶,分别催化丙酮酸生成L-乳酸和D-乳酸。在同时具有D-乳酸脱氢酶和L-乳酸脱氢酶的乳酸菌中,如果将D-乳酸脱氢酶缺失,就可以得到理论上光学纯度为100%的L-乳酸。L-乳酸脱氢酶广泛存在于微生物中,但目前只有少数乳杆菌属的L-乳酸脱氢酶基因被克隆和测序。

L-乳酸脱氢酶偏高的原因[3]

至于L-乳酸脱氢酶高的原因,有以下方面:

1.当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时,部分肝细胞受损,血清中L-乳酸脱氢酶4和L-乳酸脱氢酶5含量就会有不同程度的增高。

2.乙肝治疗方法特别是是用药不当,长期服用同一种药物时造成肾毒现象的产生。当肾毒现象出现时,血清中L-乳酸脱氢酶含量会迅速升高。

3.乙肝不进行合适积极的治疗,发展到一定程度时会造成肝脏代谢严重异常,导致肾脏功能衰竭,从而也会引起L-乳酸脱氢酶含量升高。

4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时,会引起L-乳酸脱氢酶的偏高。

偏低的原因

L-乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。血清L-乳酸脱氢酶正常范围是100~300U/L,当出现乳酸脱氢酶偏低时,常见原因如下。

L-乳酸脱氢酶偏低的原因1:检查过程中出现误差;

L-乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失调;

L-乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不好等。

总之,L-乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重,经过调理即可恢复。但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了。因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时,会引起乳酸脱氢酶的偏高。

制备[2]

于1mL离心管中加入300μL菌悬液(30mg湿菌体)和250μL磷酸钠缓冲液(pH7.0),37℃保温5min,再依次加入50μL葡萄糖(终浓度50mmol/L)和400μL苯丙酮酸(终浓度10mmol/L),反应1h后,取200μL反应液加入800μL甲醇终止反应,过0.22μm有机滤膜,进行HPLC分析;另取200μL反应液,用1mL乙酸乙酯进行萃取,上层有机相经无水硫酸钠干燥后过0.22μm有机滤膜,进行对映选择性分析。结果显示,当体系反应40min后,L-PLA的浓度为5.62mmol/L,产率为56.2%,eep>99%,当反应80min后,苯丙酮酸完全被消耗,产生8.59mmol/L的L-乳酸脱氢酶,产率为85.9%,eep>99%。

主要参考资料

[1] 黄彦, 韦宇拓, 张黎, 陈发忠, & 黄日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 应用与环境生物学报(1), 70-73.

[2] 黄彦, 韦宇拓, 张黎, 陈发忠, & 黄日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 应用与环境生物学报(1), 70-73.

[3] 杨寿钧, & 蔡妙英. . 嗜热菌的耐热l—乳酸脱氢酶的研究. 微生物学报, 031(6), 438-442.