L-乳酸脱氢酶

L-乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。L-乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于所有组织中。在动物或微生物体中，乳酸脱氢酶(简称“LDH”)是以NADH为辅酶，将丙酮酸经过生化反应生成乳酸，因此乳酸脱氢酶是乳酸菌发酵的关键酶。

于1mL离心管中加入300μL菌悬液(30mg湿菌体)和250μL磷酸钠缓冲液(pH7.0)，37℃保温5min，再依次加入50μL葡萄糖(终浓度50mmol/L)和400μL苯丙酮酸(终浓度10mmol/L)，反应1h后，取200μL反应液加入800μL甲醇终止反应，过0.22μm有机滤膜，进行HPLC分析；另取200μL反应液，用1mL乙酸乙酯进行萃取，上层有机相经无水硫酸钠干燥后过0.22μm有机滤膜，进行对映选择性分析。结果显示，当体系反应40min后，L-PLA的浓度为5.62mmol/L，产率为56.2％，eep>99％，当反应80min后，苯丙酮酸完全被消耗，产生8.59mmol/L的L-乳酸脱氢酶，产率为85.9％，eep>99％。

类白色冻干粉或3.2mol/L硫酸铵的结晶悬浮液，溶于水，pI为4.6，最适pH值6.0。稳定性：结晶酶溶液可保存6-8周活性不变，硫酸盐悬浮液可稳定一年以上，极稀溶液不稳定；最适温度39℃，温度高于60℃时迅速失活。抑制剂有过量的丙酮酸、过量的NAD、草酸、草酸一酰胺、羟基丙二酸、丙二酸、尿素、Cu²⁺、Hg²⁺、Ag⁺、4-氯汞苯甲酸，焦磷酸或磷酸缓冲液和在碱性时从辅酶I (NAD)形成的非竞争性抑制剂对氧化反应有抑制作用，过量乳酸和从还原辅酶I (NADH)形成的非竞争性抑制剂对还原反应有抑制作用；激活剂有2-氨基-2-甲基-1-丙醇、氟化物、二乙醇胺和肝素(氧化作用)。酶反应：丙酮酸盐+还原辅酶I+H⁺═乳酸盐+辅酶I。