葡聚糖

葡聚糖（glucan），是一种多糖物质，存在于某些微生物在生长过程中分泌的粘液中，分为α-葡聚糖跟β-葡聚糖，后来图伦大学Diluzio博士在面包酵母里分离出了这种能够增强抵抗力的物质确认为β-葡聚糖。
β-葡聚糖广泛存在于酵母、蘑菇、燕麦和大麦等食物里，其中β- 1,3 / 1,6存在于酵母和蘑菇葡聚糖，而β- 1,3 / 1,4存在于燕麦和大麦葡聚糖。
β-葡聚糖跟普通常见糖类（如淀粉、肝糖、糊精等）不一样，最主要的差别就在于键连接方式不一样，普通糖类的分子结构为α-1，4-糖苷键结合，而β-葡聚糖是以β-1，3-糖苷键为主体，且含有一些β-1，6-糖苷键的支链。β-葡聚糖因其特殊的键连接方式和分子内氢键的存在，造成螺旋形的分子结构，这种独特的构形很容易被免疫系统接受。

在二十世纪四十年代，Pillemer博士首次发现并报道酵母细胞壁中有一种物质具有提高免疫力的作用。之后，经过图伦大学Diluzio博士的进一步研究发现，酵母细胞壁中提高免疫力的物质是一种多糖——β-葡聚糖，并从面包酵母中分离出这种物质。 葡聚糖平均分子量约7000，与人白蛋白相近，能提高血浆胶体渗透压，吸收血管外的水分以补充血容量，从而维持血压；能使已聚集的红细胞和血小板解聚，降低血液黏滞性，从而改善微循环和组织灌流，防止休克后期的血管内凝血；能抑制凝血因子Ⅱ的激活，使凝血因子Ⅰ和凝血因子Ⅷ的活性降低，这和其抗血小板作用均可防止血栓形成。葡聚糖扩充血容量作用和抗血栓作用较右旋糖酐-40强。 右旋糖酐铁注射液为深褐色的胶体溶液。右旋糖酐铁固体为深棕褐色无定形粉末。无臭，味涩。在空气中有吸湿性。易溶于水，溶液是深褐色的胶体溶液，pH5.2-6.5，不溶于乙醇等有机溶剂。
右旋糖酐铁注射液是铁和右旋糖酐的络合物。肌肉注射后，部分铁由巨噬细胞吞噬并转至成纤维细胞，其余的铁很缓慢地从注射部分移出(72h移出50%)，经淋巴转入血浆。注射后3周仍可在血中查到，铁主要贮存于肝脾网状内皮细胞并缓慢地释放以供血红蛋白合成需要。这个吸收途径不受胃肠道控制，故贮存铁的恢复较快且完全。但血红蛋白上升速度仍和口服制剂一样，平均约每日0.15g。对缺铁性贫血有效。 抗贫血药。用于缺铁性贫血。
不良反应和禁忌 注射本品后血红蛋白未见逐渐升高者，应即停药。肝、肾功能不全者忌用。 血容量补充药。
不良反应和禁忌 偶有过敏反应。充血性心衰和有出血性疾患者禁用，心、肝、肾功能不全者慎用。 生化研究 中分子右旋糖酐主要用于增加血浆容量，维持血压，以抗休克为主。适用于大量失血时补充血液容量，维持血压。如烧伤、外伤、创伤等出血性和因失血过多所引起体克的急救。低分子右旋糖酐，主要是改善微循环，用于预防或消除血管内红细胞聚集和血栓形成。小分子右旋糖酐作用和用途与低分子右旋糖酐机似。 以蔗糖为培养基经肠膜状明串珠菌菌属发酵、精制处理而得。 微生物发酵法
菌种选育 菌种肠膜状明串珠菌(Leyconostoc meseteroides)。培养基的配制：按质量/体积的配比，将蔗糖10%，蛋白胨0.25%，磷酸氢二钠0.08%，加水至100%，煮沸溶解，滤纸过滤，取滤液3ml分装于试管中，用纱布棉花塞紧，置网格中，117.72kPa(1.2kgf/cm²) 120℃加压灭菌30min，放冷，至恒温箱中，得澄清透明液体培养基供接种用。按上述液体培养基配比，加琼脂1.5%-2%，煮沸溶解，取5ml分装于试管中，用纱布棉花塞紧，117.72 kPa (1.2kgf/cm²)，加压灭菌30min，冷却，即为固体培养基。
菌种纯化和培养 取固体培养基5支，加热熔化后，置50-60℃水浴上保温，并分别编号。在无菌橱内选取菌种试管，用白金耳蘸取一耳接种于装有固体培养基的1号试管中，摇匀，再蘸取1号试管接种于2号试管中，摇匀，依次接种至5号试管。然后趁热(约50℃)逐管倾入对应编号的培养皿中，放平，冷却，倒放于恒温箱中，25℃恒温培养24h，培养皿板上出现圆形、边缘整齐、中间微凸、透明、发黏菌落。在第3-5号培养皿内选菌种，正常菌落数应以5-20个为准。用蜡笔在培养皿外壁划圈，选定典型菌落(特征明显，大小适宜)。在无菌橱内以白金耳蘸取圈定的菌落接种于装有液体培养基的试管中，25℃培养24h。传2-3代后，进行小样发酵、水解、划分等试验，选取收率高，成分好，产量高的菌种，2-4℃冰箱保存，备扩大生产使用。
肠膜状明串珠菌[培养基]→[25℃，24h]菌落
种子培养 取液体培养基400ml(中瓶)及4000ml(大瓶)，一支菌种试管(3ml)接种于中瓶中，再将中瓶中培养好的种液约100ml接种于大瓶中。在25℃培养20-24h，终点pH3.8-4.3，发酵良好者可供生产使用。
菌落[液体培养基]→[25℃, 20-24h]种子培养液
发酵、沉淀 按蔗糖15%，蛋白胨0.25%，磷酸氢二钠0.15%，加常水至100%，制成发酵培养基盛于发酵罐中，接种量2.5%，搅拌10-15min，控制pH7-7.4，25℃左右，发酵20-24h，最后发酵液pH在4.2-5，达终点。加85%±5%的乙醇沉淀，再用60%-70%乙醇洗涤沉淀，得水解用的高分子右旋糖酐粗品，收率85%。
种子培养液[发酵培养基]→[25℃，20-24h, pH7-7.4]发酵液[85%乙醇，60%-70%乙醇]→[pH4.2-5]高分子右旋糖酐粗品
水解、中和、纯化 将高分子右旋糖酐粗品加蒸馏水加热溶解，按水解液质量计算，加盐酸0.1%，保温95-100℃，水解，补加蒸馏水稀释浓度达11%，控制终点粘度2.7-2.9，以6mol/LNaOH缓慢中和至pH6-6.5，加无水氯化钙2.4 g/L (0.24%)，最后加入766型粗粒活性炭8 g/L(0.8%)，在搅拌下进行脱色，过滤，得供划分用的水解液。
粗品[HCl, NaOH, CaCl2, 766活性炭]→[95-100℃, pH6-6.5]划分用水解液
一级划分 取水解液加入乙醇，使其浓度为40%-40.5%，在40℃保温22h后，收集上层清液，共二级划分，沉淀物为杂质及大分子右旋糖酐。
二级划分 一级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达45%-45.5%，搅拌15min，40℃保温静置22h，沉淀物为中分子右旋糖酐。
三级划分 二级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达48%-48.5%，搅拌15min，40℃保温静置22h，沉淀为低分子右旋糖酐。
四级划分 三级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达55.5%一56.5%，搅拌15min，常温静置6h，沉淀为小分子右旋糖酐。


干燥 划分所得右旋糖酐，用90%以上的乙醇调粉脱水和除去杂质，制成松散的含醇粉末，经离心，烘干，得右旋糖酐成品，总收率60%。
右旋糖酐成品[90%以上乙醇]→含醇粉末[离心，烘干]→右旋糖酐成品
注射剂的制备 将右旋糖酐成品分别与葡萄糖或氯化钠按注射剂要求制成灭菌水溶液。
右旋糖酝成品[葡萄糖，水]→葡萄糖注射液
右旋糖酐成品[氯化钠，水]→[灭菌]氯化钠注射液。 原料处理 利用右旋糖酐划分液，回收相对分子质量5000-7500的作原料。
脱色、混合 在容器中加水约300ml，加热煮沸后，加右旋糖酐100g，搅拌至全部溶解，补加水配制成100g/L。按右旋糖酐质量配比加30g/L(3%)活性炭，搅拌，煮沸15-30 min，用3号垂熔漏斗过滤，得澄明滤液，放冷至室温。取滤液至适当容器中，在搅拌下加入650g/L(65%)三氯化铁溶液200ml，搅拌均匀，得混合液。
右旋糖[蒸馏水，活性炭]→[煮沸]滤液[FeCl3]→混合液
催化 在100mm×100mm玻璃离子交换柱内，装701苯乙烯型弱碱性阴离子交换树脂，用100 g/L (10%)NaOH做再生剂，是树脂转成阴离子OH^-型，流出液pH7-8，无氯化物，比电阻在50kΩ/cm以上，供催化反应用。
将再生好的树脂柱内的水位放至树脂界面处，倒入混合液，进行动态催化反应，流出速度控制在15ml/min为宜。当深红色右旋糖酐铁流出时，立即取样检查pH值、氯化物和比电阻，其pH应在8以上，氯化物应为阴性，比电阻在2kΩ/cm以上，合格后收集。当混合液下降到树脂界面时，开始用水洗脱，进水速度控制在和流出速度相同，一般可收集到2-3L流出液。
混合液[701树脂柱]→流出液（右旋糖酐铁）
浓缩 取上述流出液进行减压浓缩，温度45-65℃之间，至1L时停止蒸馏，取样测定含铁量并酌情调节含铁量，使成2.5%。
流出液[40-65℃，减压]→浓缩液
制剂 将配好的溶液，经3号或4号垂熔玻璃漏斗过滤，按灭菌制剂操作，分装，封口，112℃，30min灭菌，即得右旋糖酐铁注射液成品。
浓缩液[112℃，30min]→右旋糖酐铁注射液成品。