大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物的应用

背景^[1-4]

大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物是从大鼠原代脑动脉血管内皮细胞提取的，大鼠原代脑动脉血管内皮细胞从正常大鼠脑组织制备。大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。内皮细胞也称血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。

它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。血管内皮细胞通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，也称内皮细胞。在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用，从而介导白细胞穿越血管壁。亦属一类非专职抗原提呈细胞。用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。

它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。心室内表面的内皮细胞称为心内膜。微血管及淋巴微管是由单一层的内皮细胞所组成。血管内皮细胞的功能血管内皮细胞是连续被覆在全身血管内膜的一层细胞群，这一细胞群被体外细胞培养成功以来，对它已有了很深入的了解。

现在认为内皮层不仅仅是血液和组织的屏障，还具有其他多种功能，如①减少血管通透性，调节组织与血液的物质交换，防止血浆成分和血液细胞无序地侵入；②抗血栓作用，平衡抗血液凝固纤溶系统和抗血小板机能，维持血液的流动性；③调节血管平滑肌功能，合成和分泌调节血管平滑肌舒张和收缩的相关因子；④抑制血管壁细胞的游走和增殖。

应用^[5][6]

用于脑脉一号联合骨髓间充质干细胞移植对缺血中风大鼠脑微血管生成的影响研究：

从脑缺血再灌注后不同时间点大鼠的体重增长率、神经功能缺损、脑梗死体积、脑组织病理改变、微血管形态学、细胞存活以及血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、血管内皮细胞标志物CD34表达等方面的动态变化,观察大鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤以及微血管新生的特点,揭示其变化规律；通过大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植、转基因VEGFBMSCs移植、脑脉一号及其联合应用对上述变化的影响,探讨脑脉一号联合干细胞移植对缺血再灌注大鼠的保护作用及脑组织微血管新生的促进作用,初步揭示其可能的作用机制。

采用雄性SD大鼠,235只,体重250g-330g,随机分组：大鼠根据处理因素分为假手术组和手术组,手术组包括模型组(简称Model组)、骨髓间充质干细胞移植组(简称BMSCs组)、转基因VEGF骨髓间充质干细胞移植组(简称BMSCs/VEGF组)、脑脉一号组(简称NMYH组)、脑脉一号联合BMSCs移植组(简称NMYH+BMSCs组)及脑脉一号联合BMSCs/VEGF移植组(简称NMYH+BMSCs/VEGF组)。假手术为8只,其余各组27只。手术组根据取材时间点不同又随机分为7d、14d、21d组,每组每个时间点分别为8、8、11只。

全骨髓贴壁培养法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过形态学观察及表面标记物鉴定细胞。应用细胞标记液氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)标记BMSCs,荧光倒置显微镜下观察其24h、21d和30d的标记情况,描绘生长曲线明确标记物对体外培养BMSCs生长特性的影响。通过阳离子脂质体介导真核表达质粒pEGFP-VEGF,65转染体外培养的BMSCs,荧光显微镜、流式细胞仪、酶联免疫吸附法(ELISA)、RT-PCR方法检测pEGFP-VEGF165目的基因的表达,MTT法检测基因转染对细胞增殖的影响。

参考文献

[1]Comparison of Bone Marrow Stromal Cells Derived From Stroke and Normal Rats for Stroke Treatment[J].Alex Zacharek,Amjad Shehadah,Jieli Chen,Xu Cui,Cynthia Roberts,Mei Lu,Michael Chopp.Stroke.2010(3)

[2]Neuroprotective effect of combined hypoxia-induced VEGF and bone marrow-derived mesenchymal stem cell treatment[J].Sung Su An,Hong Lian Jin,Keung Nyun Kim,Hyun Ah Kim,Dong Seok Kim,Joon Cho,Meng-Lu Liu,Jin Soo Oh,Do Heum Yoon,Min Hyung Lee,Yoon Ha.Child’s Nervous System.2010(3)

[3]Use of polyamidoamine dendrimers to engineer BDNF-producing human mesenchymal stem cells[J].Antos Shakhbazau,Dzmitry Shcharbin,Ihar Seviaryn,Natalya Goncharova,Svetlana Kosmacheva,Mihail Potapnev,Barbara Gabara,Maxim Ionov,Maria Bryszewska.Molecular Biology Reports.2010(4)

[4]Enhanced angiogenesis with dl-3n-butylphthalide treatment after focal cerebral ischemia in RHRSP[J].Song-Jie Liao,Jian-Wen Lin,Zhong Pei,Chun-Ling Liu,Jin-Sheng Zeng,Ru-Xun Huang.Brain Research.2009

[5]Angiogenesis after cerebral ischemia[J].Heike Beck,Karl H.Plate.Acta Neuropathologica.2009(5)

[6]陈朝.脑脉一号联合骨髓间充质干细胞移植对缺血中风大鼠脑微血管生成的影响[D].广州中医药大学,2010.