肠激酶的结构特性

肠激酶是存在于哺乳动物十二指肠内的一种异源二聚体 (heterodimeric)丝氨酸蛋白酶，分子质量为150 ku，由1条 115 ku重链和1条35 ku轻链组成，在pH 值为4.5～9.5、温度4～45℃范围内特异性水解蛋白底物，商品化的肠激酶主要有两种:天然提纯的牛肠激酶和基因工程重组牛肠激酶。

基本介绍

由于经 EK裂解融蛋白所释放的目的多肽具有和野生型完全一致的N-末端氨基酸序列，因而肠激酶可作为蛋白表达体系中融合蛋白的切割试剂。但是天然的肠激酶来源毕竟有限，并且提取分离的成本高，加之天然提取的肠激酶易为其它蛋向酶污染 ，造成切割融合蛋白的同时又降解了目的产物。而基因工程的方法正可以弥补这些不足，因而运用基因工程的方法生产肠激酶广为应用。

图1 商业化的肠激酶种类

结构特性

天然肠激酶由1条结构亚基(重链)和1条催化弧基(轻链)构成，两者通过1个分子间二硫键 结合，结构亚基负责将催化亚基固定在小肠刷状缘膜上并引导它向肠腔移动，催化亚基可 以特异性识别Asp-Asp-Asp-Asp-Iys序列，并沿序列的羧基端切下，将胰蛋白酶原活化为胰蛋白酶，从而启动各种酶原活化的级联。重组肠激酶 (recombinantEnterokinase，rEK)的分 子质量L4通常为26.3ku，具有3个糖基化位点，其糖基化分子质量大约为43ku。Vozza等发现，rEK体外实验证明有全酶酶切特异性并且相较于天然肠激酶表现出对基因工程，融 合蛋白底物的酶切活性增强，因而现多采用基因工程的方法生产肠激酶。近年来所做的尝 试多是克隆与表达235个氨基酸的轻链 (recombinantEnterokinaselightchain，rEK )。Janska等研究氨基末端残基发现了EK轻链的三维结构与类胰蛋白酶等的丝氨酸蛋白酶的 结构同源性。[1]

参考文献

[1] 张向辉,谭树华,李泰明.肠激酶特点及其基因工程的研究进展[J].药物生物技术,2005, 12:4.