显影定影试剂盒的产品介绍

背景^[1-3]

显影定影试剂盒是一个用于Western blotting后续压片后的洗片试剂。本试剂盒中的显影和定影试剂的配方特别适合于×光片的显影定影。

显影定影试剂盒

显影定影试剂盒使用方法：

1.显影液配制：显影液试剂A倒入烧杯中，加入500-700ml约50℃水,玻棒拌至充分溶解，再加入显影液试剂B,玻棒搅拌至充分溶解，然后加入显影液试剂C，玻棒搅拌至充分溶解，最后加水定容至1000 ml，玻棒搅拌混匀即可，倒入避光容器(棕或黑色瓶)中，室温避光保存。

2.定影液配制：把定影液试剂A和试剂B倒入烧杯中，加入700ml约60℃水,玻棒搅拌至充分溶解，待冷却后加入定影液试剂C，玻棒搅拌混匀后加水定容至1000 ml，玻棒搅拌混匀即可，倒入避光容器(棕或黑色瓶)中，室温避光保存。

3显影：把×光片完全浸没在显影液内，显影10秒至10分钟。具体显影时间视根据显影情况而定，可以在红灯下观察，当发现显影的程度已经达到预期目标，即可终止显影。

4水洗：在清水中冲洗干净，以完全除去显影液。

5.定影：浸没在定影液内，定影30秒至3分钟。定影时间长一点，对定影的结果没有明显影响。

6.水洗：在清水中冲洗干净,以充分洗去各种残留溶液。

显影定影试剂盒注意事项

1.ECL A液和B液在吸取过程中必须要更换吸头,A液和B液相互污染后会逐渐失效。各溶液使用后,请盖紧瓶盖,特别是B液,含有氧化剂,容易被还原而失效。

2.如果目的蛋白条带过曝,可以缩短曝光时间,或者减少样品、一抗及二抗的用量。

3.如果荧光迅速淬灭,可能原因是目的条带荧光过强,导致HRP迅速消耗ECL。

4.如果没有发光信号,可能是目的蛋白表达很弱,可延长曝光时间。

5.金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。

6.应使用高质量保鲜膜。质量较差的保鲜膜可能会淬灭荧光或由于含有杂质而污染印迹膜造成曝光背景值偏高。

7.避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8.叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

9.本产品仅用于科学研究,不得用于临床诊断,不得用于食品和药品,不得存放于普通住宅内。

10.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用^[4][5]

显影定影试剂盒可以用于ADAM17和ACE2基因干预对糖尿病心脏重构的影响及分子机制研究

探讨体外实验中当ADAM17和ACE2同时被抑制时心肌细胞自噬和凋亡的情况。研究方法1.动物实验的分组小鼠经过配繁后获得ADAM17α-MHCKO小鼠,将同窝出生的Cre阴性小鼠(ADAM17fl/fl小鼠)用于动物实验中的对照组。给予ADAM17fl/fl小鼠和ADAM17α-MHCKO小鼠尾静脉注射心肌细胞特异性启动子cTnT驱动的特异性敲减ACE2的九型腺相关病毒(AAV9-cTnT-shACE2)。动物实验分为4个组:ADAM17fl/fl DM+Vector组、ADAM17α-MHCKO DM+Vector组、ADAM17fl/fl DM+AAV9-shACE2组、ADAM17α-MHCKO DM+AAV9-shACE2组。2.小动物超声检测小鼠心功能同论文Ⅰ部分3.小鼠组织标本取材及病理检查同论文Ⅰ部分4.新生大鼠原代心肌细胞(NRCMs)的提取选择新出生的Wistar大鼠乳鼠(1d-3d)利用差速贴壁法提取原代心肌细胞。5.细胞实验的分组按照实验的设计,细胞实验的分组情况如下:(1)Vehicle组;(2)GP组;(3)GP+NC-siRNA组;(4)GP+ADAM17-siRNA组;(5)GP+ACE2-siRNA组;(6)GP+ADAM17-siRNA+ACE2-siRNA组。6.Western Blot实验对动物心脏组织和细胞进行蛋白提取后进行SDS-凝胶电泳,经过转膜、封闭、孵育一抗和二抗后进行显影定影试剂盒发光显影。

参考文献

[1]Diabetes,heart damage,and angiotensin II.What is the relationship link between them?A minireview.[J].Pedreanez Adriana;Mosquera Jesus;Munoz Nelson;Robalino Jorge;Tene Diego.Endocrine regulations.2022

[2]MiR-3682 promotes the progression of hepatocellular carcinoma(HCC)via inactivating AMPK signaling by targeting ADRA1A.[J].Zhao Wenyue;Liu Xueping.Annals of hepatology.2021

[3]2021 ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure.[J].McDonagh Theresa A;Metra Marco;Adamo Marianna;Gardner Roy S;Baumbach Andreas;Böhm Michael;Burri Haran;Butler Javed;ČelutkienėJelena;Chioncel Ovidiu;Cleland John G F;Coats Andrew J S;CrespoLeiro Maria G;Farmakis Dimitrios;Gilard Martine;Heymans Stephane;Hoes Arno W;Jaarsma Tiny;Jankowska Ewa A;Lainscak Mitja;Lam Carolyn S P;Lyon Alexander R;McMurray John J V;Mebazaa Alex;Mindham Richard;Muneretto Claudio;Francesco Piepoli Massimo;Price Susanna;Rosano Giuseppe M C;Ruschitzka Frank;Kathrine Skibelund Anne.European heart journal.2021

[4]Autophagy in the Diabetic Heart:A Potential Pharmacotherapeutic Target in Diabetic Cardiomyopathy[J].Dewanjee Saikat;Vallamkondu Jayalakshmi;Kalra Rajkumar Singh;John Albin;Reddy P.Hemachandra;Kandimalla Ramesh.Ageing Research Reviews.2021

[5]薛飞.ADAM17和ACE2基因干预对糖尿病心脏重构的影响及分子机制研究[D].山东大学,2023.