类杆菌胆汁七叶苷琼脂的应用

背景^[1-3]

类杆菌胆汁七叶苷琼脂主要用于脆弱拟杆菌群的分离培养。

检验原理：

胰蛋白胨、大豆胨提供细菌生长的基本营养；氯化钠维持渗透压；较高含量的牛胆粉可抑制革兰氏阳性菌的生长，并能与氯化血红素一同促进脆弱拟杆菌的生长；庆大霉素为光谱抗生素，对多数肠杆菌、假单胞菌、葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌等有较强的抗菌活性，可抑制多数杂菌的生长，可促进脆弱拟杆菌的生长；琼脂为凝固剂；七叶苷和柠檬酸铁铵为指示剂，脆弱拟杆菌可分解七叶苷生成七叶素，与柠檬酸铁铵反应变黑，使菌落呈现棕黑色。

类杆菌胆汁七叶苷琼脂

类杆菌胆汁七叶苷琼脂配制方法：

1.称取61.6 g培养基，加蒸馏水至1 L，搅拌均匀，pH值

调节至7.0±0.2；

2.121℃高温灭菌15 min或115℃高温灭菌20 min；

3.固体培养基冷却到50-60℃，倾倒平皿，4℃避光保存备用。

类杆菌胆汁七叶苷琼脂使用注意事项：

1.注意无菌操作，避免微生物污染。

2.根据菌株生长特性，可适当调整pH值。

3.该培养基仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其它用途。

4.称量时注意粉尘，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。

5.干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。未开封产品保质期三年，开封后根据存放条件的不同保质时间存在一定的差异。

应用^[4][5]

类杆菌胆汁七叶苷琼脂可以用于鸡源主要肠球菌快速检测方法的建立

肠球菌作为一种重要的条件致病菌,可引起多种动物和人感染,以鸡最为敏感,尤其以雏鸡最为严重。可引起雏鸡生长抑制、心内膜炎、败血症、脑软化、骨髓炎等疾病,给养鸡业带来了严重的损失。因此,探究鸡感染肠球菌种类及其毒力,建立鸡源主要肠球菌的快速检测方法,可应用于鸡肠球菌病和雏鸡及鸡胚早期感染的防治。为探究鹑鸡肠球菌和小肠肠球菌感染情况,采集1日龄病、弱雏鸡,进行大体剖检和病理切片显微观察病理变化。肝脏分离纯化细菌,对分离株进行形态学观察、生化鉴定,提取其DNA对16S rDNA基因序列进行PCR扩增、测序、比对进行鉴定。结果显示病、弱雏鸡腹部偏大、脐部出血,剖检可见肝脏呈土黄色,卵黄吸收不良;镜检可见肺脏充血;肝脏组织充血、淤血,充满空泡。分离株在营养琼脂培养基上,菌落细小;在类杆菌胆汁七叶苷琼脂上,培养基呈棕黑色;革兰染色为阳性球菌;生化试验结果符合肠球菌的特点;结合16S rDNA基因序列比对分析,鉴定分离株EH-1为小肠肠球菌,分离株EG-1、EG-2为鹑鸡肠球菌。较早在国内确定了鸡的小肠肠球菌和鹑鸡肠球菌感染。为弄清不同种肠球菌毒力强弱及毒力基因携带情况。以PCR方法对4株肠球菌的6种毒力基因进行检测,并进行鸡胚致病性试验,对3株肠球菌进行毒力分析。结果显示分离株EG-1仅检测出ace基因;分离株EH-1和EG-2未检测出6种毒力基因;屎肠球菌Efm-1检测出efa A、asal、ace、gel E共4种毒力基因;鸡胚尿囊腔接菌后,存活鸡胚未发现明显病变,死亡鸡胚有明显的充血和出血病变。鹑鸡肠球菌、小肠肠球菌、屎肠球菌的半数致死量分别为9.33×10～4CFU、6.10×10～6CFU、1.31×10～6CFU。提示不同种肠球菌其毒力基因携带数量、种类均有差异,且3种肠球菌致病性均较弱,其毒力基因携带情况与毒力未发现有明显的关联性。

参考文献

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[5]邓云贵.鸡源主要肠球菌快速检测方法的建立[D].河北工程大学,2021.