人子宫平滑肌细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人子宫平滑肌细胞提取物是从人子宫平滑肌细胞提取的，人子宫平滑肌细胞从正常人子宫组织制备。人子宫平滑肌细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。平滑肌，是非横纹肌的肌肉组织。分布在人体动脉和静脉血管壁、膀胱、子宫、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫状肌和虹膜。

平滑肌虽然也具有同骨骼肌类似的肌丝结构，但由于它们不存在像骨骼肌那样平行而有序的排列（平滑肌的肌丝有它自己的“有序的”排列），它的特点是细胞内部存在一个细胞骨架，包含一些卵圆形的称为致密体的结构，它们也间隔地出现于细胞膜的内侧，称为致密区，并且后者与相邻细胞的类似结构相对，而且两层细胞膜也在此处连结甚紧，因而共同组成了一种机械性耦联，借以完成细胞间张力的传递；细胞间也存在别的连接形式，如缝隙连接，它们可以实现细胞间的电耦联和化学耦联。

在致密体和致密区中发现有同骨骼肌Z带中类似的蛋白成分，故认为这两种结构可能是与细肌丝连接的部位。另外，在致密体和致密区之间还有一种直径介于粗、细肌丝之间的丝状物存在，它们是一种称为结蛋白（desmin）的聚合体。这样由丝状物联结起来的致密体和膜内侧的致密区就形成了完整的细胞内构架。

应用^[7][8]

人子宫平滑肌细胞提取物可用于子宫平滑肌细胞中SM22α蛋白的作用机制研究：

SM22α是钙结合蛋白,也是细胞骨架蛋白,该蛋白可通过促进actin纤维聚集成束,形成应力纤维而在平滑肌收缩过程中起调节作用。也有资料显示SM22α调控基质金属蛋白酶9(mmp-9)转录。这些研究都在血管平滑肌细胞中体现。SM22α蛋白在子宫平滑肌作用没在文献中体现。而分娩过程是子宫平滑肌协调收缩完成,虽然分娩是由多因素作用、多途径调节、多分子参与、多阶段变化的交互作用过程,但子宫平滑肌的收缩是分娩发动的关键环节。

妊娠期子宫平滑肌细胞的原代培养及鉴定目的：获得体外研究SM22α蛋白的原代培养的人妊娠期子宫平滑肌细胞。

方法：选取足月初产剖宫产产妇子宫体部平滑肌组织分别采用组织块贴壁培养法和酶消化法进行子宫平滑肌细胞原代培养,进而采用细胞免疫化学的方法进行鉴定。

结果：成功培养出妊娠期子宫平滑肌细胞；荧光显色显示SM22a在子宫平滑肌细胞中与肌动蛋白走向一致,呈条索状。

结论：成功获得原代培养的子宫平滑肌细胞；子宫平滑肌中SM22a蛋白在形态学上与子宫平滑肌细胞中肌动蛋白走向一致,呈条索状,推测SM22α蛋白在子宫平滑肌细胞起骨架作用。

人SM22a基因序列由Gene Bank获得,通过PRIMER PREMIER软件设计SM22a引物序列和SiRNA引物序列,利用基因克隆技术构建pCMV-Myc-SM22a质粒；进一步利用基因技术在293FT细胞上表达SM22a,筛查有效的SiRNA引物；最后在体外培养的子宫平滑肌细胞进行高效SiRNA引物验证。

参考文献

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