噻唑橙的应用

背景及概述^[1]

噻唑橙染料是菁染料的一种，也是一类荧光分子探针，这类探针比荧光素、罗丹明等其他的荧光分子探针具有更多的优点。这类染料种类很多，吸收范围很广，从可见光一直分布到远红外区域，可比性和选择性都非常大。菁染料及菁染料衍生物都具有很强的吸光能力和很强的荧光发射性能，能够作为荧光分子探针以共价键与生物分子结合，用荧光或者激光发射器能够检测到其荧光信号。

当体系中存在不止一种待标记成分时，测定过程就会变得复杂，这种活性衍生物就会发挥其特殊作用而提高测定速率。大部分待染料和其衍生物发出的荧光强而稳定，在显微镜不会迅速淬灭。这类染料能够作偶合试剂，简单而且有效；菁染料类型众多，结构改变，染料在水中的溶解性随之变化，同时电荷数也会相应改变。菁染料的分子量相对来说比较小，一般都小于，不会阻碍探针与目标物质的连接，也不会影响其性能。。

应用^[2-5]

1）检测四环素，其特征在于利用噻唑橙对G-四联体构型核酸适配体的特殊识别作用以及核酸适配体与目标物间的特异性结合检测四环素，包括以下步骤：通过圆二色谱测定核酸适配体与目标物结合前后的结构变化；通过测定荧光光谱图观察四环素、核酸适配体、噻唑橙体系的反应；建立基于荧光探针噻唑橙的非标记核酸适配体传感器检测四环素；通过测定荧光光谱图测定所建立的非标记核酸适配体传感器对四环素的选择性；运用所建立的非标记核酸适配体传感器测定实际样品中的四环素。本方法提供了一种对四环素有高选择性，同时又简单、快速、灵敏的检测方法，具有良好的实用价值，便于推广。

2）用于流式细胞仪分析评价小鼠骨髓红细胞生成功能，该方法将小鼠骨髓细胞分别与噻唑橙、大鼠IgG和APC?Rat?Anti?Mouse?Ter119染色孵育。孵育次序依次为：先将小鼠骨髓细胞与噻唑橙孵育适当时间，离心，弃上清，再加入大鼠IgG孵育适当时间，然后再加入APC?Rat?Anti?Mouse?Ter119孵育适当时间。最后再加入PBS，在流式细胞仪上定量分析成熟红细胞，网织红细胞，幼红细胞和原红细胞在小鼠骨髓整体细胞中的比例，从而分析评价小鼠骨髓红细胞生成功能。本发明快速、准确、简单易行且成本较低，有利于推广应用。

3）制备一种兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束，以具有pH敏感性的两亲性壳聚糖为载药胶束，以聚乙二醇为连接臂，分别在其两端接枝叶酸和荧光染料噻唑橙，从而构建得到一种集靶向性、pH敏感性、隐形性和荧光示踪于一体的多功能壳聚糖载药胶束。

本发明的壳聚糖载药胶束具有良好的荧光性能，且其对抗癌药5?氟尿嘧啶具有良好的载药性能，载药效率可达42.76％；在生理环境pH值(pH＝7.4)条件下，8h内累积释放药量仅为2％，26h累积释药量不足8％，可减少壳聚糖载药胶束在输运抗癌药5?氟尿嘧啶对正常组织细胞的毒副作用。同时，在肿瘤细胞溶酶体pH值(pH＝4.5)条件下，表现出良好的pH敏感释药性能，5?氟尿嘧啶的释放量在4h时达到95％。

4）噻唑橙对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。通过日本岛津SHIMADZUUV-2550型光谱仪测得噻唑橙(TO)在血浆中的吸收峰位于475nm处，选择发射光谱为此波长的LED二极管制成光源，血浆中加入伪狂犬病毒及TO光敏剂，进行光敏剂浓度(s)、光照强度(E)、光照时间(T)3因素正交试验，Reed-Munch方法测定病毒效价，分析病毒灭活效果。

结果血浆病毒灭活的动力学曲线表明在浓度为80μmol/L时，TO、病毒与血浆预作用24h照射20min或预作用48h照射5min，均可灭活伪狂犬病毒≥7.43log10(检测下限以下)。正交试验得出血浆病毒灭活条件：T=15min，S=80μmol/L，E=1.33E-01w·m-2·nm-1。在以上组合条件下多次重复血浆病毒灭活效果，可灭活伪狂犬病毒≥5.20log10(检测下限以下)。结论血浆中加入噻唑橙做为光敏剂，对伪狂犬病毒的灭活效果是肯定的和可重复的。

主要参考资料

[1] 噻唑橙单体的合成及研究

[2] CN201610450706.7非标记核酸适配体荧光传感器检测四环素

[3] CN201610099317.4一种应用流式细胞仪分析评价小鼠骨髓红细胞生成功能的方法

[4] CN201610993903.3一种兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束及其制备方法

[5] 噻唑橙对血浆中伪狂犬病毒灭活效果的研究