兔血清的应用

背景^[1-7]

兔血清采用兔血液为原料，经采集、批量混合、分装、0.1μm微孔滤器无菌过滤分装而成。

兔血清的特点：

1、主要作用提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素。生长因子包括胰岛素，胰岛素样生长因子，表皮生长因子，成纤维细胞生长因子，血小板衍生生长因子等。激素有皮质醇，雌二醇，睾酮。黄体酮和甲状腺等。
2、提供有利于细胞所需的贴付因子和伸展因子。正如前面所提到的多刷细胞为贴壁细胞，他们必须贴付在某种载体上才能生长，血清可提供所需的贴付因子和伸展因子，如纤维结合蛋白，如姑苏，昆布氨酸和胶原等。
3、提供可识别金属，激素，维生素和脂类的结合蛋白，如白蛋白可与维生素，脂类和激素结合，并将它们带入细胞，贴传递蛋白可结合和传送铁离子。他们还可消除某系毒素和金属的毒性作用。
4、提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素。脂肪酸中磷脂酶、胆固醇和前列腺E等，他们可能与其他生长因子结合后起作用。微量元素中有铜锌钴钼硒等，他们对酶有激活作用，并可保护自由基第DNA的损害。

兔血清鉴别方式：兔血液凝固析出的淡黄色透明液体后将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆的区别。

而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

应用^[8][9]

兔血清可用ELISA相关实验：

在EB病毒潜伏膜蛋白2B表位特异性兔血清抗体的制备和鉴定实验中利用分子克隆技术,将已鉴定的EBV LMP2蛋白的3个B细胞表位,即RIEDPPFNSLL,TLNLT和KSLSSTEFIPN,以柔性肽(GS)加以串联连接,经原核密码子优化后全基因合成,并经BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆至pET32a(+)载体,测序鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基硫代-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。

用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化表达产物,与佐剂乳化后皮下多点注射日本大耳白兔,隔周免疫1次,共3次。分别于免疫的0、2、4、6、8周取血,采用ELISA方法检测IgG抗体水平,采用Western blot和细胞免疫荧光法检测兔血清抗体的免疫反应性和结合特异性。

结果EBV LMP2B表位重组蛋白可通过原核表达系统进行表达,纯化的表达蛋白免疫兔可产生特异性IgG抗体,效价达1∶30 000。经Western blot法和细胞免疫荧光法鉴定,制备的兔血清抗体可识别LMP2重组蛋白和LMP2天然蛋白。结论成功获得了EBV LMP2串联B表位重组蛋白,制备的兔多克隆血清抗体效价高,特异性强,为LMP2的生物学和免疫学研究奠定了基础。

参考文献

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