兔血清的应用

背景^[1-3]

兔血清采用兔血液为原料，经采集、批量混合、分装、0.1μm微孔滤器无菌过滤分装而成，适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

兔血液凝固析出的淡黄色透明液体后将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆的区别。

使用方法：

使用时，用PBS（0.01mol/L pH7.2-7.4）将封闭血清原液稀释10或20倍，配成10%或者5%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

应用^[4][5]

用于针刀疗法对膝骨关节炎模型兔血清中MMP-3和MMP-13浓度的影响研究

通过观察针刀治疗后膝骨关节炎兔模型血清中MMP-3和MMP-13含量变化的影响,以初步探讨MMPs与骨关节炎的关系,从而阐述针刀疗法治疗膝骨关节炎的作用机制,为针刀松解法治疗膝骨关节炎的临床应用提供实验依据。

研究方法将48只健康清洁6月龄新西兰家兔（雌雄各半,体重2.25±0.1kg）随机分为4组,每组各12只,四组分别为空白组、模型组、针刀组和电针组。空白组不参加造模,其余三组采用左后肢伸直位固定制动法制备实验性膝骨关节炎家兔模型。模型组不进行干预,针刀组每周干预治疗1次,电针组每周干预3次,两组均干预3周。

干预结束3周后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测模型兔血清中MMP-3和MMP-13的浓度,分析针刀松解法对血清中MMPs含量的影响。研究结果在针刀和电针治疗前和治疗后,分别对模型组、针刀组和电针组实验兔用改良Lequesne MG评估方法进行行为学观察。

结果显示治疗前3组行为学评分值没有显著差异（P>0.05）,治疗后,针刀组、电针组与模型组相比分值明显下降,差异显著,具有统计学意义（P<0.05）。

ELISA检测兔KOA血清中MMP-3、MMP-13水平的结果表明：模型组血清中MMP-3、MMP-13含量明显增加,与其它组相比差异有统计学意义（P<0.05）；针刀组血清中MMP-3、MMP-13含量显著降低,与模型组及电针组相比较差异有统计学意义（P<0.05）。

研究结论针刀疗法能够降低膝骨关节炎模型兔血清中MMP-3和MMP-13的浓度,因此针刀疗法能减少软骨细胞外基质的降解,抑制关节软骨的破坏,控制软骨的退行性改变,达到改善膝骨关节炎的症状、治疗KOA的作用。

参考文献

[1]Optical Tomography of MMP Activity Allows a Sensitive Noninvasive Characterization of the Invasiveness and Angiogenesis of SCC Xenografts[J].Wa’el Al Rawashdeh,Susanne Arns,Felix Gremse,Josef Ehling,Ruth Knüchel-Clarke,Stefan Kray,Felix Sp?ler,Fabian Kiessling,Wiltrud Lederle.Neoplasia.2014(3)

[2]The role of subchondral bone resorption pits in osteoarthritis:MMP production by cells derived from bone marrow[J].A.Shibakawa,K.Yudoh,K.Masuko-Hongo,T.Kato,K.Nishioka,H.Nakamura.Osteoarthritis and Cartilage.2005(8)

[3]Increased stromelysin-1（MMP-3）,proteoglycan degradation（3B3-and 7D4）and collagen damage in cyclically load-injured articular cartilage[J].Peggy M.Lin,Chih-Tung Christopher Chen,Peter A.Torzilli.Osteoarthritis and Cartilage.2004(6)

[4]Linkage of chondrocyte apoptosis and cartilage degradation in human osteoarthritis[J].SanshiroHashimoto,Robert L.Ochs,SetsuroKomiya,MartinLotz.Arthritis&Rheumatism.2004(9)

[5]马丽娜.针刀疗法对膝骨关节炎模型兔血清中MMP-3和MMP-13浓度的影响[D].北京中医药大学,2016.