大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒利用了酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）技术，这是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的高灵敏度检测方法。该方法可以准确定量血浆中的TAT水平，这对于研究血液凝固状态、血栓形成以及抗凝治疗监控等领域具有重要意义。

凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）是凝血过程中的一个关键指标，由凝血酶与抗凝血酶结合而成。这一复合物的浓度反映了体内凝血酶的生成和活性，因此，通过测定TAT的水平，可以监测机体的凝血状态和血栓前状态。在实验研究中，TAT常作为评估抗凝药物效果、研究血栓形成机制及血液疾病诊断的生物标志物。

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒通常包含必要的试剂和标准品，用户只需准备样本即可进行测试。该试剂盒具有高特异性和灵敏度，能够提供快速可靠的检测结果，是生物医学研究中不可或缺的工具之一。

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒

一、产品基本信息

产品名称：大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒

英文名称：Rat TAT ELISA Kit

用途：仅供科研使用，不能用于临床诊断。

检测范围：通常试剂盒的检测范围在15.625-1000pg/ml之间，具体范围可能因不同厂家和批次而有所差异。

灵敏度：通常小于15pg/ml，具体数值需参考产品说明书。

检测方法：采用双抗体夹心法ELISA（酶联免疫吸附试验），通过检测样品中TAT与特异性抗体的结合来定量TAT的浓度。

二、试剂盒组成

试剂盒通常包含以下主要组分（具体数量和规格可能因不同厂家而异）：

酶标板：预包被有抗大鼠TAT单抗的96孔或48孔微孔板。

标准品：已知浓度的TAT标准品，用于绘制标准曲线。

酶标抗体工作液：辣根过氧化物酶标记的抗体，用于检测样品中的TAT。

样品稀释液：用于稀释待测样品。

洗涤液：用于洗涤反应板，去除未结合的杂质。

底物工作液：在酶的作用下显色，用于检测反应结果。

终止液：停止显色反应，使颜色稳定。

说明书：包含详细的操作步骤、注意事项、储存条件等信息。

三、操作步骤

操作步骤通常包括以下几个步骤（具体步骤可能因不同厂家而异）：

收集标本：收集大鼠的血清、血浆、尿液等生物液体，并尽快进行检测。

标准品液配制：按照说明书要求配制不同浓度的标准品溶液。

加样：将标准品和待测样品加入酶标板中。

孵育：在适宜的温度下孵育一定时间，使TAT与抗体充分结合。

洗涤：用洗涤液洗涤反应板，去除未结合的杂质。

显色：加入底物工作液，在酶的作用下显色。

终止：加入终止液，停止显色反应。

读数：用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中TAT的浓度。

应用^[4][5]

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒可以用于血栓通注射液抗博来霉素诱导大鼠肺纤维化药效和机制研究

采用博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型,观察血栓通注射液对大鼠模型的药效学作用,并基于整体动物和细胞实验对其药效机制进行探索性研究。本课题的研究为血栓通注射液临床应用以及治疗肺纤维化药物的开发提供理论依据和实验基础。

研究方法1血栓通注射液对博来霉素所致肺纤维化大鼠的药效学研究气管内注射博来霉素(5 mg·kg-1)对Wistar大鼠造模。按照体质量随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮组(50 mg·kg-1)、血栓通注射液低、中和高剂量组(27、54、81 mg·kg-1),假手术组和模型组均给予等体积的生理盐水。每日一次,连续给药7 d、14 d、28 d,观察大鼠一般生存状态和体质量,进行以下指标检测:①肺系数,②肺功能指标,③肺部影像学,④并进行苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)和Masson染色(masson staining,Masson)观察肺组织病理学,⑤采用大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定大鼠肺组织中Ⅰ型胶原(collagen I,COL-I)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的表达水平,⑥免疫荧光法测定α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和COL-I表达水平,⑦免疫印迹试验法(western blot,WB)测定各组大鼠肺组织中α-SMA、COL-I、波形蛋白(Vimentin,Vim)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达水平。采用ELISA测定大鼠肺组织中凝血相关因子凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、可溶性纤维蛋白单体复合物(soluble fibrin monomer complex,SFMC)和血浆凝血酶原片段(prothrombin fragment 1+2,F1+2)含量。2血栓通注射液药效机制探索研究采用凝血酶(thrombin,THR)与不同浓度的三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)共培养MRC-5细胞,采用细胞计数试剂盒法(cell counting kit-8,CCK-8)筛选的适宜浓度及给药时长,利用高内涵分析技术检测其对细胞数目的影响。采用RT-PCR和Western Blot法测定细胞中的α-SMA、Vimentin和E-cad变化水平;采用RT-PCR和Western Blot法测定细胞中的PAR-1表达水平;采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰技术,沉默PAR-1后,用血栓通注射液有效成分三七总皂苷进行干预,RT-PCR和Western Blot法测定细胞中的α-SMA、Vimentin和E-cad变化水平,观察上述蛋白水平的变化,验证所得结果。

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒ELISA结果表明,造模7、14和28 d后,与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中TAT,F1+2和SFMC水平显著升高。与模型组比较,在7、14和28 d的结果中,吡非尼酮组均没有显著性差异,7 d时血栓通注射剂高剂量组大鼠肺组织中SFMC含量的相对含量明显下降;14 d时血栓通注射剂低、中和高剂量组大鼠肺组织中SFMC含量的相对含量明显下降;28 d时各组无明显差异。7 d、14 d和28 d时各给药组大鼠肺组织中TAT,F1+2含量的相对含量无明显差异。

参考文献

[1]Xueshuantong injection alleviates cerebral microcirculation disorder in middle cerebral artery occlusion/reperfusion rats by suppressing inflammation via JNK mediated JAK2/STAT3 and NF-κB signaling pathways.[J].Wang Gaorui;Chen Ziyu;Song Yingying;Wu Hui;Chen Ming;Lai Shusheng;Wu Xiaojun.Journal of ethnopharmacology,2022

[2]The Plasminogen–Activator Plasmin System in Physiological and Pathophysiological Angiogenesis[J].Ismail Asmaa Anwar;Shaker Baraah Tariq;Bajou Khalid.International Journal of Molecular Sciences,2021

[3]Salvianolic acid B inhalation solution enhances antifibrotic and anticoagulant effects in a rat model of pulmonary fibrosis[J].Zhang Tianyi;Liu Mengjiao;Gao Yunhang;Li Han;Song Ling;Hou Hongping;Chen Tengfei;Ma Lina;Zhang Guangping;Ye Zuguang.Biomedicine&Pharmacotherapy,2021

[4]Tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor type 1 in patients with symptomatic lower extremity artery disease.[J].Wieczór Radosław;Wieczór Anna Maria;RośćDanuta.Minerva cardiology and angiology,2021

[5]王慧颖.血栓通注射液抗博来霉素诱导大鼠肺纤维化药效和机制研究[D].中国中医科学院,2023.