大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠血清、血浆或其他相关生物液体中OPN浓度的实验试剂盒。这些试剂盒主要用于科研目的，不适用于临床诊断。以下是关于大鼠骨桥素（OPN）ELISA试剂盒的一些详细信息：

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒检测原理：试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。具体来说，使用抗大鼠OPN抗体包被于酶标板上，样品中的大鼠OPN会与包被抗体结合。接着依次加入生物素化的抗大鼠OPN抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物。加入显色底物TMB后，在辣根过氧化物酶的催化下，TMB呈现蓝色，加终止液后变成黄色。最后，在450 nm波长处测量吸光度（OD值），通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠OPN的浓度。

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒基本性能：

灵敏度：灵敏度为0.94 ng/mL。

检测范围：检测范围为1.56-100 ng/mL。

特异性：可检测样本中的大鼠OPN，且与其他类似物无明显交叉反应。

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒组成：试剂盒通常包含预包被酶标板、标准品、稀释液、HRP标记抗体、显色底物、终止液等。

保存条件：试剂盒应在2-8°C保存，有效期标注于标签上（通常是6个月）。

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等生物液体。

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒可以用于大鼠正畸牙齿移动过程中张力侧牙周组织RUNX2、OSX、OPN的表达

骨桥蛋白OPN又叫骨桥素，于1983年由Herring等在骨基质中分离出来，后来一些学者分别在肾、内耳、平滑肌、巨噬细胞等不同的组织细胞中也发现了OPN。OPN是一种分泌型的磷酸化糖蛋白，属于非胶原蛋白分子的一种，同时也是成骨细胞的表型之一。在骨组织中，OPN可由成骨细胞、破骨细胞和骨细胞分泌，在成熟的骨组织中OPN主要集中于新骨形成等骨改建活跃的位置，其在骨吸收、骨基质矿化以及维持骨组织与周围组织的完整性中起着非常关键的作用。

研究通过建立大鼠的正畸牙齿移动(orthodontic tooth movement,OTM)的动物模型，观察张力侧牙周组织中成骨相关因子RUNX2、OSX、OPN的表达情况，明确正畸力对牙周组织改建的影响及作用机制，为进一步系统性研究正畸力作用下牙周组织骨改建的分子生物学积累新的资料。

目的:观察SD大鼠OTM过程中张力侧牙周组织中RUNX2、OSX、OPN的表达，探讨RUNX2、OSX、OPN在OTM过程中的作用。

方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠40只，6-8周龄，个体质量(200±10)g。实验动物随机分为4组，每组10只，分别为:正畸牙齿移动8h、24h、3d和7d组。安装正畸牙齿移动装置的SD大鼠左侧上颌第一磨牙为实验组，未安装实验装置的右侧上颌第一磨牙为自身对照组。10%水合氯醛经腹腔注射(3ml/kg)麻醉SD大鼠后将其固定，在SD大鼠的上前牙唇面及轴角处近颈部磨出深0.5～1.0mm轴沟，将实验侧上颌第一磨牙和前牙间用0．012英寸正畸不锈钢结扎丝固定正畸用镍钛螺旋拉簧，同时用正畸粘结剂加强固位，近中牵引大鼠的磨牙。分别在加力8h、24h、3d和7d后处死实验动物，取上颌骨制备组织标本。通过苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,H-E)，免疫组织化学方法及大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒检测SD大鼠张力侧牙周组织中RUNX2、OSX、OPN的表达。

大鼠骨桥素(OPN)Elisa试剂盒结果:张力侧牙周膜宽度随加力时间延长而增大，尤其在牙齿移动的第7d最为显著。牙槽骨边缘可见新生血管。在牙齿移动最初的8h和24h观察不到明显的阳性细胞和阳性区域。与对照组相比较，第24h,3d,7d可见RUNX2阳性细胞呈线性排列在牙槽骨和牙骨质边缘。同时牙槽骨和牙骨质周围可见大量OSX阳性细胞。第3d,7d可见OPN阳性区域遍布于牙周膜，尤其在新生牙槽骨边缘最为显著。

参考文献

[1]Differentiation of activated monocytes into osteoclast-like cells on a hydroxyapatite substrate:An in vitro study[J].Paola Narducci;;Vanessa Nicolin.Annals of Anatomy,2009(4)

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[4]Role forβ1 integrins in cortical osteocytes during acute musculoskeletal disuse[J].Jonathan A.Phillips;;Eduardo A.C.Almeida;;Esther L.Hill;;J.Ignacio Aguirre;;Mercedes F.Rivera;;Inaam Nachbandi;;Thomas J.Wronski;;Marjolein C.H.van der Meulen;;Ruth K.Globus.Matrix Biology,2008(7)

[5]韩旻轩.大鼠正畸牙齿移动过程中张力侧牙周组织RUNX2、OSX、OPN的表达[D].南京医科大学,2013.