嘌呤核苷磷酸化酶的应用与制备

嘌呤核苷磷酸化酶简称PNP，是嘌呤补救合成途径的关键酶之一，广泛存在于哺乳动物、寄生虫和微生物中。按照嘌呤核苷磷酸化酶的蛋白结构可分为两类：低分子量的同源三聚体类和高分子量的同源六聚体类。其中哺乳动物和部分微生物(例如鼠伤寒沙门氏菌salmonellatyphimurium，嗜热古菌芝田硫化叶菌Sulfolobus solfataricus等)的嘌呤核苷磷酸化酶属于同源三聚体类，其分子量约为80～100kDa，每个亚基的分子量为30～32kDa，通常此类嘌呤核苷磷酸化酶只能以鸟嘌呤核苷和肌苷作为底物。而同源六聚体类的嘌呤核苷磷酸化酶，底物专一性不强，既可接受鸟嘌呤核苷和肌苷作为底物，也可以腺嘌呤核苷作为底物。其分子量约为150kDa，亚基分子量为25kDa左右。

应用

由于嘌呤核苷磷酸化酶特殊的生物活性，使得其在医药领域得到了较大的应用：①应用于核苷类药物的合成，大量研究表明，核苷类(核苷及其类似物)具有广泛的抗肿瘤抗病毒的效果。②应用于肿瘤靶向治疗；③应用于无机磷和ATPase酶活力等的定量测定。

制备方法

本发明的目的在于提供一种经过分子改造并具有较高热稳定性的嘌呤核苷磷酸化酶，以及高产量的制备该嘌呤核苷磷酸化酶的方法。

本发明第一方面提供了一种突变的假交替单胞菌属的嘌呤核苷磷酸化酶，与野生型的氨基酸序列相比，所述突变的嘌呤核苷磷酸化酶的氨基酸序列中第98位Asp突变为Tyr。

在另一优选例中，所述突变的嘌呤核苷磷酸化酶具有以下一种或多种特性：

(a)比酶活≥30U/mg，较佳地为≥45U/mg；

(b)储存在碱性环境中；

(c)失活温度≥60℃；

(d)在0－55℃，保存时间≥3h。

在另一优选例中，所述突变的嘌呤核苷磷酸化酶的最适PH值为7.0-9.0，较佳地为7.5-8.5，更佳地为8.0。

本发明第二方面提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码第一方面所述突变的嘌呤核苷磷酸化酶。