对HCT-8/人盲肠腺癌细胞HCT-8的相关研究

概述^[1]

组织来源：结肠；回盲肠结直肠腺癌；培养条件：RPMI-1640 +10% FBS；形态：贴壁；上皮细胞样。

相关研究^[2-4]

将HCT-8人类结肠癌细胞分成二甲双胍组(MET)、顺铂组(DDP)、二甲双胍联合顺铂组(MET+DDP)、空白对照组(CK) 4组，MTT实验观察4组细胞于24 h、48 h、72 h时的增殖能力；流式细胞术观察各组细胞48 h的凋亡比例；Western blotting观察各组细胞48 h时凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3(激活型)以及AKT/GSK-3通路蛋白的表达水平。结果该实验中MET+DDP组的细胞增殖能力弱于其它三组(P<0. 05)；细胞凋亡比例高于其它三组(P<0. 05)；Bax、caspase-3(激活型)表达量高于其它组群，Bcl-2、P-AKT、P-GSK-3表达量低于其它组群，AKT、GSK-3在4组中表达量相对恒定(P>0. 05)。结论二甲双胍、顺铂可能通过下调AKT/GSK-3信号通路，改变Bcl-2家族蛋白的表达活性从而促进HCT-8人类结肠癌细胞的凋亡，并促进p-caspase-3剪切转化为caspase-3(激活型)；二甲双胍与顺铂可协同发挥促HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的作用。

体外常规培养HCT-8；设立低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白对照组；各实验组均根据不同剂量加入肿节风注射液。应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测加入不同剂量肿节风注射液后24、48 h和72 h后各组肿瘤细胞生长抑制情况；用细胞克隆形成实验将细胞加入不同浓度的肿节风后再连续培养12 d后进行上级检测，计算细胞的克隆形成率。

Annexin V/PI检测肿瘤细胞与肿节风注射液反应24 h后的凋亡情况。结果低剂量组对结肠癌HCT-8细胞没有明显的生长抑制作用。MTT显示同样的作用时间下，中剂量组及高剂量组肿瘤细胞抑制率比较差异有显著统计学意义(P <0. 01)，治疗48、72h后高剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义(P <0. 05)；细胞克隆形成实验显示高剂量组对肿瘤细胞生长的抑制作用较为明显，各加药组与空白对照组相比差异有统计学意义(P <0. 05)。Annexin V/PI显示，随着肿节风浓度的增加，HCT-8细胞的凋亡率也呈现上升趋势，空白对照组与加药组比较差异有统计学意义(P <0. 05)。结论肿节风对结肠癌HCT-8肿瘤细胞具有诱导凋亡的作用。

采用CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸作用不同时间后HCT-8细胞的增殖情况；根据CCK-8法结果确定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h，考察HCT-8细胞的凋亡和相关基因及蛋白的表达；通过流式细胞术检测HCT-8细胞的凋亡率；采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测p53、Bax和Puma基因的m RNA表达；通过Western blotting法检测p53、Bax、Puma和active Caspase-9的蛋白表达水平。

结果迷迭香酸能够抑制HCT-8细胞的增殖，并呈时间和浓度依赖性。15、45μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞早期凋亡(P<0.01)，75μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞晚期凋亡(P<0.01)。迷迭香酸可以使Puma的m RNA表达上调，并呈浓度依赖性；45、75μmol/L的迷迭香酸可以使p53和Bax的m RNA表达升高(P<0.05)。迷迭香酸可以上调Puma、Bax和active Caspase-9的蛋白表达水平，并呈浓度依赖性；75μmol/L的迷迭香酸可以使p53的蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论迷迭香酸对HCT-8细胞具有明显的增殖抑制作用，并且是通过诱导凋亡实现的，促凋亡蛋白p53、Puma、Bax和active Caspase-9诱导了凋亡的发生。

主要参考资料

[1] HCT-8/人盲肠腺癌细胞说明书

[2] 于敬坤，李明志，随振阳，张琪，田炜，胡琨，杨光华，张国志，王长友.二甲双胍与顺铂联合诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的研究[J].中国比较医学杂志，2019，29(02):43-50.

[3] 谢雅，杨关根，裘建明，闫文峰.肿节风诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的体外实验研究[J].医药论坛杂志，2018，39(10):10-13+16.

[4] 娄诤，陆仲夏，俞雅蓉，王大维.迷迭香酸对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响及分子机制研究[J].中草药，2018，49(13):3051-3055.