人多巴胺(DA)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人多巴胺(DA)Elisa试剂盒是一种用于定量检测人体样本中多巴胺（DA）含量的实验工具。它基于酶联免疫吸附法（ELISA）的原理，通过特异性抗体与样本中的多巴胺结合，形成抗原-抗体复合物，进而通过酶标记的二抗和底物反应，产生可测量的信号，从而实现对多巴胺含量的定量检测。

多巴胺是一种重要的神经递质，它在大脑中的运动控制、奖赏和动机、注意力、情感等方面起着关键作用。因此，多巴胺含量的异常与多种疾病的发生有关，如帕金森病、注意缺陷多动障碍、精神分裂症等。通过使用人多巴胺ELISA试剂盒，研究人员和医生可以准确、快速地检测人体样本中多巴胺的含量，为相关疾病的诊断和治疗提供重要参考。

人多巴胺(DA)Elisa试剂盒

人多巴胺(DA)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

在使用人多巴胺ELISA试剂盒时，需要注意以下事项：

严格按照试剂盒的说明书进行操作，确保实验的准确性和可靠性。

样本的收集和保存应遵循适当的方法，避免溶血、高血脂等因素对实验结果的影响。

试剂的保存和使用应遵守相应的规定，避免试剂的污染和失效。

实验过程中应注意安全，避免直接接触有毒或有害的试剂。

应用^[4][5]

人多巴胺(DA)Elisa试剂盒可以用于RNA干扰α-突触核蛋白基因表达对甲基苯丙胺中毒大鼠神经毒性的影响及差异蛋白质的筛选和鉴定

建立a-syn沉默大鼠模型,运用行为学、酶化学等方法,全面了解a-syn抑制后对METH导致的多巴胺系统和氧化应激系统损伤的影响；在此基础上,利用iTRAQ技术,筛选和鉴定出给予METH刺激及RNA干扰a-syn后,大鼠纹状体的差异表达蛋白质,结合已知蛋白质的功能,探讨a-syn在METH神经毒性机制中的作用。

方法：1.RNA干扰a-syn大鼠模型的建立成年雄性Wistar大鼠,随机分成4组,①对照组(control,CON);②模型组(model,model);③阴性病毒组(empty vector);④阳性病毒组(RNAi):使用本课题组前期合成并鉴定有效的a-syn-ShRNA重组病毒。利用脑立体定向注射技术向大鼠纹状体注射相应的物质,CON组和model组均注射生理盐水,empty vector组注射阴性病毒,RNAi组注射a-syn-ShRNA重组病毒。注射后二周,取各组大鼠纹状体检测a-syn的表达,实时荧光定量PCR、Western Blot分别检测a-syn在基因和蛋白水平的表达变化。2.RNA干扰a-syn对METH毒性损伤的影响利用成功建立的a-syn沉默大鼠模型,给予METH刺激,CON组腹腔注射生理盐水,model组、empty vector组和RNAi组动物腹腔注射METH,剂量15mg/kg,每天早8：00点、晚6：00点各注射一次,连续注射4天,共8次。观察动物的行为变化,体重、进食量、饮水量的变化；人多巴胺(DA)Elisa试剂盒检测各组大鼠纹状体多巴胺(DA)和络氨酸羟化酶(TH)的含量；TUNEL法检测细胞凋亡；酶化学方法检测ROS、NOS、NO的活性变化,分别用ROS荧光检测试剂盒、NOS活性检测试剂盒、NOS检测试剂盒检测。

参考文献

[1]Involvement of Macroautophagy in Multiple System Atrophy and Protein Aggregate Formation in Oligodendrocytes[J].Lisa Schwarz;Olaf Goldbaum;Markus Bergmann;Stefan Probst-Cousin;Christiane Richter-Landsberg.Journal of Molecular Neuroscience,2012(2)

[2]Stimulant Abuse:Pharmacology,Cocaine,Methamphetamine,Treatment,Attempts at Pharmacotherapy[J].Daniel Ciccarone.Primary Care:Clinics in Office Practice,2011(1)

[3]Decreased reuptake of dopamine in the dorsal striatum in the absence of alpha-synuclein[J].Heramb Chadchankar;;Jouni Ihalainen;;Heikki Tanila;;Leonid Yavich.Brain Research,2011

[4]Actin on disease–Studying the pathobiology of cell motility using Dictyostelium discoideum[J].Michael J.Carnell;;Robert H.Insall.Seminars in Cell and Developmental Biology,2010(1)

[5]台运春.RNA干扰α-突触核蛋白基因表达对甲基苯丙胺中毒大鼠神经毒性的影响及差异蛋白质的筛选和鉴定[D].南方医科大学,2014.