附子灵的作用

背景^[1][2]

附子灵是从附子的生物碱部位分 离得到的一种C19型二萜类化合物，国内外已见附子灵在抗心律失常、抗心力衰竭和镇痛的活性以及用途，附子灵的LD50较大，安全剂量范围较大。 并且对于对抗乌头碱、氯仿所致大鼠心律失常，普鲁帕酮、戊巴比妥钠所致大鼠急性心力衰竭具有显著的效果。可作为预防和治疗心律失常和心力衰竭疾病的药物。对抗大鼠缺血性休克、抗LPS致大鼠感染性休克具有显著的效果，可作为预防和治疗休克疾病的药物。

制备^[1]

附子灵或其可药用酸加成盐的制备方法，具体包括如下方法：

方法一：

a.取生附片，粉碎，用有机溶剂提取，将提取液减压浓缩至浸膏，加水溶解，加酸调pH 至2～5，用乙酸乙酯萃取1～4次，优选3次，合并萃取液并减压浓缩干得油脂部位，再加碱 调pH至7～12，优选pH至9～11，用乙酸乙酯萃取1～4次，优选3次，合并萃取液并减压浓 缩干得总生物碱部位；

b.将总生物碱部位的浸膏过中性氧化铝柱、碱化硅胶柱或制备柱色谱反复分离并重结晶，或者将总生物碱部位的浸膏用高速逆流色谱分离。

方法二：

a.取生附片，粉碎，用酸水提取，浸提2～4次，每次1.5～2.5天，优选浸提3次，每次2 天，过滤，合并滤液，减压浓缩至适量体积，用乙酸乙酯萃取1～4次，优选3次，合并萃取液并减压浓缩干得油脂部位，再加碱调pH至7～12，优选pH至9～11，用乙酸乙酯萃取1～4 次，优选3次，合并萃取液并减压浓缩干得总生物碱部位；

b.将总生物碱部位的浸膏过中性氧化铝柱、碱化硅胶柱或制备柱色谱反复分离并重结晶，或者将总生物碱部位的浸膏用高速逆流色谱分离。

方法三：

粉碎，用有机溶剂提取，将提取液减压浓缩至浸膏，加水溶解，加酸调pH 至2～5，用乙酸乙酯萃取1～4次，优选3次，合并萃取液并减压浓缩干得油脂部位，再加碱调pH至7～12，优选pH至9～11，用乙酸乙酯萃取1～4次，优选3次，合并萃取液并减压浓 缩干得总生物碱部位；

b.利用多缓冲纸层析富集碱性不同的生物碱的原理，将总生物碱部位过中性氧化铝柱后所得的总浸膏通过不同pH梯度萃取从而达到富集附子灵的目的，

①总浸膏用酸水溶解后调不同酸度pH，采用乙酸乙酯或极性与其相近的溶剂进行萃取；

②用碱水调节步骤①萃取后的酸水液的pH值至不同碱度，采用乙酸乙酯或极性与其相 近的溶剂进行萃取，合并萃取液，浓缩后通过重结晶可得附子灵。

含量检测^[3]

附子提取物及蒸附片中尼奥灵、宋果灵和附子灵的含量测定：照中国药典高效液 相色谱法测定。

1)色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Agilent Extend C18色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.1％(体积分数)三乙胺水溶液(B)，梯度洗脱(0～8min， 10％A→20％A；8～15min，20％A→25％A；15～25min，25％A→25％A；25～30min，25％A→ 28％A；30～31min，28％A→60％A；31～42min，60％A→65％A)；检测器：蒸发光散射检测器， 以氮气为载气，蒸发温度50℃，漂移温度：40℃，载气流速1.5L·min^-1，增益为1；理论板数按 尼奥灵或宋果灵或附子灵峰计应不低于5000。

2)对照品溶液的制备：取各对照品适量，精密称定，加50％(体积)甲醇溶液制成每 1mL含尼奥灵0.5mg，附子灵0.3mg，宋果灵0.15mg的混合对照品溶液。

3)提取物供试品溶液的制备：取附子水溶性生物碱提取物(罗春梅等，附子水溶性 生物碱的提取纯化工艺研究，中草药，017，48(12):2415)约50mg，精密称定，置10mL容量瓶 中，加入50％(体积)甲醇水溶液超声溶解，定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤 液，即得。

4)蒸附片供试品溶液的制备：取蒸附片粉末2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.05mol/L盐酸溶液50mL，摇匀，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，放冷，摇匀， 于8000r·min^-1离心6min，精密量取上清液25mL，60℃下减压回收至约1-2mL，转移至5mL量 瓶中，加水洗涤定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

5)测定法：分别精密吸取对照品溶液5ul、10ul与被检品溶液各10-20ul，注入液相色谱仪测定。

主要参考资料

[1] CN201110382794.9 附子灵的制备方法及其新用途

[2] CN201210102941.7 附子灵在制备预防和治疗休克药物中的应用

[3] CN201810620129.0 一种高效液相色谱法检测尼奥灵和/或宋果灵和/或附子灵的方法