CHK2抗体的应用

背景^[1-3]

CHK2抗体是针对CHK2蛋白的特异性抗体。CHK2是一个细胞周期检控点激酶，其氨基末端区含有多个丝氨酸和苏氨酸残基，这些残基在特定条件下可以被ATM/ATR激酶磷酸化。例如，在紫外照射、离子辐射等DNA损伤诱导条件下，CHK2的Thr68等位点会被磷酸化。磷酸化后的CHK2可以促进其寡聚体的形成，并进一步导致其自身的磷酸化，这是激活其下游信号通路所必需的。

CHK2在细胞周期调控和DNA损伤应答中起到关键作用。它可以通过磷酸化多个底物，如细胞分裂周期25同源物（Cdc25）、P53、乳腺癌遗传易感基因1（BRCA1）蛋白等，来阻滞细胞周期进程，从而促进细胞对DNA损伤的修复或诱导凋亡。此外，即使在没有DNA损伤的情况下，CHK2也可以磷酸化BRCA1，这对于维持有丝分裂纺锤体组装的正确性以及染色体稳定性至关重要。

CHK2抗体

CHK2抗体是一种在医学研究中经常使用的抗体，它针对的是细胞周期检测点激酶2（Checkpoint Kinase 2，简称CHK2）。CHK2是一种重要的蛋白激酶，它通过监测DNA损伤和复制压力来调控细胞周期进程，确保细胞在DNA受损时能够暂停分裂，以避免遗传给后代的损伤。

CHK2抗体主要用于科研实验中，例如免疫印迹（Western Blot）、免疫荧光染色（Immunofluorescence）等技术，以检测和定量细胞或组织样本中CHK2蛋白的表达和活性。在肿瘤学研究中，CHK2的功能和调控机制是研究的热点之一，因为CHK2的异常活性与多种肿瘤的发展和治疗响应有关。

CHK2抗体在科研领域中具有广泛的应用，可用于研究CHK2的表达、定位、磷酸化状态以及与其他蛋白质的相互作用等。这种抗体通常可用于多种实验技术，如Western blot（WB）、免疫细胞化学（ICC/IF）、免疫组织化学（IHC-P）以及免疫沉淀（IP）等。

应用^[4][5]

CHK2抗体可以用于马立克氏病病毒致瘤蛋白Meq及鸡ATM和CHK2抗体制备

致力于制备能特异性识别Meq、鸡ATM和CHK2抗体,为进一步研究MDV调节宿主细胞DDR信号通路的分子机理提供重要的生物材料。

主要包括以下三部分内容:1.MDV致瘤蛋白Meq单克隆抗体制备选取马立克氏病毒(MDV)RB1B株的Meq蛋白N端1-169位和C端272-340位氨基酸,构建原核表达质粒pCold-TF-Meq169和pGEX-4T-1-MeeqC,在BL21(DE3)细菌中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析,并免疫Balb/c小鼠,利用IFA及WB检测多抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株,结果:Meq169单抗筛选出了4株阳性杂交瘤细胞株,即1C11、3E4、3G10和5H11。通过IFA将获得的单抗用于检测强毒株Md5或弱毒株CVI988感染的CEF细胞,结果显示,Meq169单抗与MDV感染形成的细胞病变呈阳性反应;MeqC单抗筛选出了10株具有IFA反应性的阳性杂交瘤细胞株,即1B5、1E10、2C11、2C12、2E10、2G9、3B7、3E8、3F11和4B8;其中,2C12还具有WB反应性。

2. 鸡ATM单克隆抗体制备通过对鸡ATM氨基酸序列的抗原性分析,选取C端2993-3050位氨基酸,常规PCR扩增相应的核苷酸序列,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达质粒pGEX-4T-1-ATMC,转化入Rosetta感受态经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE对表达产物进行分离鉴定,证实了重组ATMC蛋白可得到有效表达;表达产物免疫Balb/c小鼠,将转染重组真核表达质粒pcDNA3-ATMC的293T作为检测源,利用IFA检测多抗血清,结果显示多抗血清具有良好的荧光效价;取阳性小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用IFA筛选阳性杂交瘤细胞株,最后筛选出了12株具有IFA反应性的阳性杂交瘤细胞株,即1F3、2B10、2H8、3G3、3G12、4A10、4B4、4B11、4C7、4D3、4D5及4E9;其中,2B10还具有WB反应性。

3.鸡CHK2抗体制备通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡chk2基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,构建原核表达质粒pGEX-4T-3-Chk2,将重组原核表达质粒转化入BL21(DE3)感受态细胞经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用SDS-PAGE对表达产物进行检测,证实重组Chk2蛋白得到了高效表达,且主要以包涵体的形式存在;表达产物免疫Balb/c小鼠,利用CHK2抗体间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)检测多抗血清,结果显示多抗血清具有良好的IFA效价和WB效价;利用杂交瘤技术筛选获得了9株能分泌特异性识别鸡CHK2抗体的阳性杂交瘤细胞株,并将2G1C9接种小鼠腹腔获得效价更高的腹水单抗。

参考文献

[1]Regulators in the DNA damage response[J].Yunhua Liu;;Yujing Li;;Xiongbin Lu.Archives of Biochemistry and Biophysics,2016

[2]ATM kinase:Much more than a DNA damage responsive protein[J].Ayushi Guleria;;Sudhir Chandna.DNA Repair,2016

[3]Damage-induced BRCA1 phosphorylation by Chk2 contributes to the timing of end resection[J].Balaji Parameswaran;;Huai-Chin Chiang;;Yunzhe Lu;;Julia Coates;;Chu-Xia Deng;;Richard Baer;;Hui-Kuan Lin;;Rong Li;;Tanya T Paull;;Yanfen Hu.Cell Cycle,2015(3)

[4]DNA viruses and the cellular DNA-damage response[J].Andrew S.Turnell;;Roger J.Grand.Journal of General Virology,2012(Pt 1)

[5]高俊娜.马立克氏病病毒致瘤蛋白Meq及鸡ATM和Chk2单克隆抗体制备[D].南京农业大学,2018.