SW 48的应用

背景^[1-3]

SW 48是一种来源于人结肠癌的细胞系，常用于研究结肠癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略。该细胞系具有以下特点：

来源：SW 48细胞系来源于人结肠癌组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。

形态特征：SW 48细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。

生长特性：SW 48细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。

侵袭转移特性：SW 48细胞具有较强的侵袭和转移能力，可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。

其他特性：SW 48细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究结肠癌细胞增殖相关疾病的模型。此外，SW 48细胞还具有一些特殊的基因表达模式，如KRAS突变等，这些特性使其成为研究特定类型的结肠癌的重要工具。

SW 48

SW 48细胞系培养操作

1)复苏SW 48细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SW 48细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SW 48细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SW 48可以用于MALAT1-AKAP9-CIP4分子信号轴调节结直肠癌的增殖、侵袭和转移

探讨MALAT1-AKAP9-CIP4分子信号轴如何调节结直肠癌的增殖、侵袭和转移,为探讨结直肠癌生长、转移机理提供可靠的实验依据。

研究方法1.结直肠癌细胞中MALAT1调控AKAP9表达的相关分子机制研究(1)利用RNA-IP、免疫共沉淀(Co-IP)和免疫荧光共定位技术,验证MALAT1与剪接因子SRSF1蛋白和SRPK1蛋白发生相互作用。

(2) 利用Western blotting和荧光定量RT-PCR检测Scranmble-SW48、RNAa-MALAT1-SW480和RNAi-MALAT1-SW480细胞中SRSF1蛋白的表达情况；利用Western blotting、免疫荧光、细胞核浆分离技术检测Scranmble-SW480、RNAa-MALAT1-SW480和RNAi-MALAT1-SW480细胞中磷酸化的SRSF1蛋白的表达以及细胞亚定位情况。

(3) 利用Western blotting、荧光定量RT-PCR和免疫荧光检测Scranmble-SW48、RNAa-MALAT1-SW480和RNAi-MALAT1-SW480细胞中SRPK1蛋白的表达；利用SRPK1蛋白活性抑制剂SRPIN340按浓度梯度处理RNAa-MALAT1-SW480细胞之后,采用Western blotting技术,检测处理后RNAa-MALAT1-SW480细胞中SRPK1、AKAP9、磷酸化SRSF1蛋白的表达改变情况。

(4) 利用Western blotting和细胞核浆分离技术,检测RNAi-MALAT1-SW480细胞中过表达SRPK1蛋白后SRPK1 AKAP9和磷酸化SRSF1蛋白的表达改变；利用CCK8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验,检测RNAi-MALAT1-S W480细胞中过表达SRPK1蛋白后对体外结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。

(5) 利用Western blotting和细胞核浆分离技术,检测RNAa-MALAT1-S W480细胞中干扰SRPK1蛋白后SRPK1、AKAP9和磷酸化SRSF1蛋白的表达改变；利用CCK8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验,检测RNAa-MALAT1-SW480细胞中干扰SRPK1蛋白对体外结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。

用细胞核浆分离技术和Western blotting检测Scramble-SW480、RNAi-MALAT1/Vector-SW480和RNAi-MALAT1/SRPK1-S W480细胞中细胞核与细胞浆中磷酸化SRSF1的表达情况。结果显示在细胞浆中未检测到明显的磷酸化SRSF1蛋白表达,磷酸化SRSF1蛋白表达主要位于细胞核中：与Scramble-SW480细胞核蛋白组相比,RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞核蛋白组中磷酸化SRSF1蛋白的表达明显下调(F=473.610,P<0.001)；与RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞核蛋白组相比,RNAi-MALAT1/SRPK 1-S W480细胞核蛋白组中磷酸化SRSF1蛋白的表达水平得以回复(F=473.610,P<0.001)。

细胞核中得以回复表达的磷酸化SRSF1蛋白促进了AKAP9前体mRNA的有效剪接,故在RNAi-MALAT1-SW480细胞回复SRPK1蛋白表达之后,AKAP9的表达同时也得到了回复。利用CCK8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验,检测Scramble-SW48、RNAi-MALAT1/Vector-SW480和RNAi-MALAT1/SRPK1-SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK8细胞增殖实验结果表明：与Scramble-SW480细胞组相比,RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞组细胞的增殖能力下降(F=155.933,P<0.001)；然而,在RNAi-MALAT1-SW480细胞中回复SRPK1表达之后,与RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞组相比,RNAi-MALAT1/SRPK1-SW480细胞的增殖能力得到回复(F=155.933,P<0.001)。

细胞划痕实验transwell迁移实验结果表明：与Scramble-SW480细胞组相比,RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞的迁移能力明显下调(F=2645,P<0.001;F=2020,P<0.001)；然而,在RNAi-MALAT1-SW480细胞中回复SRPK1表达之后,与RNAi-MALAT1/Vector-SW480细胞组相比,RNAi-MALAT1/SRPK 1-SW480细胞的迁移能力明显得到回复(F=2645,P<0.001;F=2020,P<0.001)。

参考文献

[1]MALAT1 promotes colorectal cancer cell proliferation/migration/invasion via PRKA kinase anchor protein 9[J].Min-Hui Yang;;Zhi-Yan Hu;;Chuan Xu;;Lin-Ying Xie;;Xiao-Yan Wang;;Shi-You Chen;;Zu-Guo Li.BBA-Molecular Basis of Disease,2015

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[3]The CDC42-Interacting Protein 4 Controls Epithelial Cell Cohesion and Tumor Dissemination[J].Yannève Rolland;;Paola Marighetti;;Chiara Malinverno;;Stefano Confalonieri;;Chiara Luise;;Nadia Ducano;;Andrea Palamidessi;;Sara Bisi;;Hiroaki Kajiho;;Flavia Troglio;;Olga G.Shcherbakova;;Alexander R.Dunn;;Amanda Oldani;;Letizia Lanzetti;;Pier Paolo Di Fiore;;Andrea Disanza;;Giorgio Scita.Developmental Cell,2014

[4]Long non-coding RNAs:modulators of nuclear structure and function[J].Jan H Bergmann;;David L Spector.Current Opinion in Cell Biology,2014

[5]胡志燕.MALAT1-AKAP9-CIP4分子信号轴调节结直肠癌的增殖、侵袭和转移[D].南方医科大学,2017.