KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞是一种来源于人食管鳞癌组织的细胞系。这种细胞系在培养过程中能够保持其生物学特性，并可用于研究人食管鳞癌的发生、发展、治疗和药物筛选等方面的实验。KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞是从一位67岁经过顺铂及辐照治疗的患有高分化食管鳞癌的日本女患者的颈部食管组织中分离建系。癌组织已侵袭至颈动脉外膜。细胞携带有p53突变和MYC、HST1和CYCLIN D1的扩增。在裸鼠体内可形成高分化肿瘤组织。

KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞的保存条件通常为低温保存，并且需要在高纯度的条件下进行培养。这种细胞系具有一定的异质性，可以作为研究其他肿瘤细胞的模型之一。

KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞

KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞培养操作

1)复苏KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞可以用于食管鳞癌特异的超级增强子相关癌基因研究

借助食管鳞癌超级增强子图谱,寻找和食管鳞癌发病、预后相关的超级增强子相关癌基因。实验方法:获取食管鳞癌细胞系TE7和KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞的超级增强子谱,利用本实验室已发表的食管鳞癌mRNA表达数据,分析食管鳞癌特异超级增强子相关基因在肿瘤组织与癌旁组织中的表达情况,筛选出在肿瘤组织与癌旁组织中差异表达的食管鳞癌特异超级增强子相关基因。通过多因素Cox回归分析筛选可预测预后的超级增强子相关基因。

实验结果:本实验筛选出KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞特异超级增强子相关蛋白编码基因共162个。162个基因在肿瘤组织和癌旁组织中的平均表达水平均显著高于非超级增强子相关基因(p<0.001)。在食管鳞癌肿瘤组织和癌旁组织中差异表达的基因共112个(p<0.05),其中高表达的有62个,低表达的有50个。多因素Cox回归分析显示TNM分期(p=0.0040,HR=2.77,95%CI[1.38-5.54])、淋巴结转移数(p=0.0139,HR=1.16,95%CI[1.03-1.30])和PKP1表达水平(p=0.0020,HR=0.71,95%CI[0.57-0.88])是食管鳞癌的独立预后因素。

实验结论:食管鳞癌细胞系TE7和KYSE510细胞系|人食管鳞癌细胞共有的食管鳞癌特异超级增强子相关基因共162个,与局部粘附、PI3K/Akt等信号通路相关。162个基因在肿瘤组织和癌旁组织中的平均表达水平均显著高于非超级增强子相关基因。多因素Cox回归分析结果显示TNM分期、淋巴结转移数、PKP1表达水平为食管鳞癌患者的独立预后因素。PKP1高表达的患者死亡风险更低,可以作为食管鳞癌患者预后预测的分子标志物,其在癌症发生发展中的作用尚需进一步研究。

参考文献

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