NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞的应用

背景^[1-3]

NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞是一种来源于人类非小细胞肺癌的贴壁细胞系。这些细胞具有贴壁生长的特点，即它们能够在培养皿或培养瓶中附着在固体表面上生长。

NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞已经被广泛应用于癌症研究中，特别是在肺癌的研究中。这些细胞系可以用于体外实验，以评估不同药物、治疗方法和基因对癌细胞的影响。此外，它们还可以用于研究肿瘤发生和发展的机制，以及寻找新的治疗靶点。

NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞

一．NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备1640（推荐YJ-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

应用^[4-5]

NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞可以用于CFTR氯离子通道对肺癌细胞增殖、迁移的影响及机制

本研究中,利用qPCR、Western Blot、免疫细胞化学实验方法,比较CFTR在人正常支气管上皮细胞HBE、人支气管上皮细胞BEAS-2B、人支气管肺泡腺癌细胞NCI-H1650、人肺泡Ⅱ型腺癌细胞A549、人肺鳞癌细胞NCI-H226、NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞、人KRAS突变Ⅲ级表皮样肺癌细胞Calu-1中表达量的区别。利用免疫荧光实验方法,研究CFTR在肺癌细胞中的定位。

利用三种CFTR抑制剂(CFTRinh-172、GlyH-101、BPO-27)和激活剂(Genistein、Forskolin、IBMX)作为工具药,通过细胞增殖、细胞凋亡、细胞划痕、细胞侵袭、Western Blot实验,研究CFTR的氯离子通道功能对上述不同类型的肺癌增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及作用机制。

主要研究结果如下:1.qPCR、Western Blot和免疫细胞化学实验结果显示,CFTR在以下几种细胞中的表达量从高到低依次为HBE、H1650、A549、Calu-1、NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞、BEAS-2B。其中,CFTR在HBE中的表达量远高于人支气管上皮细胞BEAS-2B。CFTR在肺癌细胞中的表达量高于人支气管上皮细胞BEAS-2B。CFTR在肺腺癌细胞H1650和A549中的表达量高于肺鳞癌细胞H226。CFTR在支气管肺泡腺癌细胞H1650中的表达量高于肺泡Ⅱ型腺癌细胞A549。CFTR在KRAS突变的肺癌细胞Calu-1中的表达量低于未发生突变的肺腺癌细胞H1650和A549。

2. 免疫荧光实验结果显示,CFTR定位于肺癌细胞的细胞膜和细胞质,在细胞质中的定位较多。

3.细胞毒性实验结果显示,CFTRinh-172的浓度小于100μM时,对H1650和NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞无毒性;小于50μM时,对A549和Calu-1无毒性。GlyH-101的浓度小于50μM时,对Calu-1无毒性;小于25μM时,对H1650、A549和H226无毒性。BPO-27的浓度小于25 n M时,对H1650、Calu-1和H226无毒性;小于20 n M时,对A549无毒性。Genistein的浓度小于100μM时,对H1650和Calu-1无毒性;小于50μM时,对A549和H226无毒性。IBMX的浓度小于100μM时,对Calu-1无毒性;小于50μM时,对H1650、A549和H226无毒性。Forskolin的浓度小于100μM时,对H1650、A549、Calu-1和H226都无毒性。

4.细胞增殖实验结果显示,CFTR抑制剂CFTRinh-172、GlyH-101和BPO-27能够促进H1650、A549、Calu-1、NCI-H125细胞系|人非小细胞肺癌细胞的增殖。在H1650中,CFTRinh-172的最佳浓度为12.5μM,BPO-27的最佳浓度为12.5 n M。在A549中,CFTRinh-172的最佳浓度为3.125μM,GlyH-101的最佳浓度为1.5625μM,BPO-27的最佳浓度为6.25 n M。在Calu-1中,GlyH-101的最佳浓度为3.125μM,BPO-27的最佳浓度为3.125 n M。在H226中,CFTRinh-172的最佳浓度为12.5μM,GlyH-101的最佳浓度为1.5625μM,BPO-27的最佳浓度为12.5 n M。

参考文献

[1]Cystic fibrosis:a gastrointestinal cancer syndrome.Mordechai Slae;;Michael Wilschanski.The Lancet Oncology,2018

[2]Cftr Modulates Wnt/β-Catenin Signaling and Stem Cell Proliferation in Murine Intestine.Ashlee M.Strubberg;;Jinghua Liu;;Nancy M.Walker;;Casey D.Stefanski;;R.John MacLeod;;Scott T.Magness;;Lane L.Clarke.Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepat,2018

[3]Cancer Risk in Patients With Cystic Fibrosis.Antonio Ponzetto.Gastroenterology,2018

[4]Forskolin improves sensitivity to doxorubicin of triple negative breast cancer cells via Protein Kinase A-mediated ERK1/2 inhibition.Michela Illiano;;Luigi Sapio;;Alessia Salzillo;;Lucia Capasso;;Ilaria Caiafa;;Emilio Chiosi;;Annamaria Spina;;Silvio Naviglio.Biochemical Pharmacology,2018

[5]高晓誉.CFTR氯离子通道对肺癌细胞增殖、迁移的影响及机制[D].辽宁师范大学,2021.