白花前胡甲素的作用

背景及概述^[1][2]

中药前胡为伞形科植物白花前胡(Peucedanum praeruptrum Dunn)或紫花前胡(P. decursivum maxim)的干燥根，具有散风清热，降气化痰的功效，作为止咳化痰平喘药而广 泛应用。白花前胡甲素(dl-praeruptorin A，Pd-Ia)为白花前胡根中提取出的一种角型吡 喃香豆素，是白花前胡的主要有效成分，呈白色针尖状结晶，脂溶性，易溶于有机溶剂中。

近年来药理研究表明，Pd-Ia作为一种钙通道阻滞剂和钾通道开放剂，具有保护心肌缺血和局灶性脑缺血急性损伤的作用；Pd-Ia可作为一种新型药物，对心血管及呼吸系统疾病，特别是冠心病的临床治疗及预防有潜在且广阔的应用前景。具有剂量小、疗效显著、毒副作用小的特点。

结构

作用和用途^[2]

1）白花前胡甲素(Pd-Ia)对气管平滑肌的作用研究：白花前胡甲素有舒张肠管平滑肌作用和钙拮抗作用。研究Pd-Ia 对对高钾，乙酰胆碱预收缩的离体家兔气管 平滑肌的作用。结果表明，白花前胡甲素对高钾及乙酰胆碱(Ach)诱发的家兔气管平滑肌有较强的松驰作用。尤其对高钾收缩的松驰作用比较强。高钾使气管平滑肌膜去极化，引起电位依帧性钙通 (PDC)开放，钙跨膜内流导致平滑肌收缩。

Pd-Ia 对高钾收缩的较强抑制作用，提示其可能具有对 PDC 选择性的阻滞作用。白花前胡甲素对气管平滑肌的松弛作用与维拉帕米(Ver)相似，其作用机制可考虑为对高钾诱发收缩反应的较强抑制作用与抑制 PDC 有关；而对乙酰胆碱(Ach)诱发收缩反应的抑制作用与抑制细胞内 Ca2+释放有关。

2）白花前胡甲素(Pd-Ia)对心肌细胞的作用研究：采用放免法检测急性缺血再灌注大鼠血清白细胞介素(IL-6) 水平，研究了 Pd-Ia 抗缺血再灌注损伤的机制，认为 Pd-Ia 对缺血再灌注 大鼠血清 IL-6 水平有明显抑制作用，其高剂量组作用强度大致与硝苯地平相近。

推测 Pd-Ia 可能通过钙拮抗或 K+通道开放作用抑制氧自由基形成，进一步抑制氧自由基能激活核转录因子—kB(NF—kB)激活途径而达到降低 缺血再灌注大鼠血清中 Pd-Ia 水平及减轻中性粒细胞浸润程度。用细胞膜片钳制方法观察了中药白花前胡有效成分白花前胡甲素(Pd-Ia)对豚鼠心室肌单细胞迟发性外向钾电流(Ik)的影响。

Pd-Ia 以剂量依赖的方式增加钾电流(Ik)，其浓度接近 l nmo1.L-1，EC50 约 0.2.nmol•L-1，效应浓度约为 1μmol.L-1，增加钾电流(Ik)2. 5±0.5 倍(P＜0.01)，Pd-Ia 的此种作用通过冲洗可部分消退。从电流---电压关系可知：的激活电压接近-40 mV.1μmol•L Pd-Ia 使 V1/2左移 7mV，曲线的斜率改变-0.65 mV，经比较无统计学意义，提示 Pd-la 对钾电流(Ik)的激活动力学过程无明显影响。

结果表明，Pd-la 能促进 K＋ 通道开放。探讨白花前胡甲素(Pd-Ia)对 Ang II 诱导的心肌细胞肥大及核转录因子 c-Jun 蛋白表达水平的影响。方法：体外原代培养乳鼠心肌细胞；免疫细胞化学检测核转录因子 c-Jun 蛋白表达情况；[3 H]亮氨酸掺 入法及[3 H]胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞内蛋白、DNA 合成。

结果显示AnglI(10-6mol•L-1 )刺激心肌细胞 2h 后，细胞核内 c-Jun 蛋白表达显著增强。为对照组的 2.8 倍(P＜0.01)；24h 后，细胞内 DNA、蛋白合成显著增加(P＜0.05)。Pd-Ia 对此有显著抑制作用(P＜0.05)。认为 Pd-Ia 能够拮 抗 An I 诱导的心肌细胞肥大，其机制可能与抑制 Ang II 诱导的心肌细胞 c-Jun 蛋白表达上调有关。

药代动力学^[3]

以香豆素为内标物建立LC-MS分析方法，色谱柱为Hypersil ODS2柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-水-乙酸（75：25：0.1），流速为1000μL·min^-1，柱温为25℃，进样量为30μL。采用电喷雾电离源，选择反应监测（MRM）方式进行正离子检测。给健康雄性Wistar大鼠静脉注射和口服灌胃白花前胡甲素5mg·kg^-1后用所建立的LC-MS法测定不同时间的血浆药物浓度，并采用WinNonlin药物动力学软件中非房室模型分析方法对血药浓度-时间数据进行处理。

以华蟾毒精为内标物，采用Hypersil-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱，以甲醇-水（75：25）为流动相，流速1000μL·min^-1，检测波长321 nm，柱温25℃，进样量20μL。超速离心法制备大鼠肝微粒体，HPLC法测定孵育液中白花前胡甲素原形药物的浓度，研究白花前胡甲素的酶促动力学，同时观察不同浓度肝微粒体蛋白对白花前胡甲素代谢的影响，并采用透析法研究白花前胡甲素的血浆蛋白结合率。

结果显示LC-MS检测白花前胡甲素在大鼠血浆中的浓度，其检测限为1 ng·mL^-1，白花前胡甲素浓度在1～1000 ng·mL^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系（r=0.9999）；准确度为92.2%～106.0%；日内、日间精密度分别为2.1%～8.2%、2.8%～5.9%。静脉注射白花前胡甲素5 mg·kg^-1的药动学参数：t_1/2：（10.71±0.27）h；CL：（1.09±0.04）L·h^-1；V_Z：（16.78±0.95）L；AUC_inf：（1152.40±46.86）ng·（h·mL）^-1。口服灌胃Pd-Ia 5 mg·kg^-1的药动学参数：t_1/2：（9.94±1.27）h；CL：（1.51±0.14）L·h^-1；V_Z：（21.57±0.83）L；AUC_inf：（828.95±74.47）μg·（h·mL）^-1。

HPLC法检测白花前胡甲素，浓度在1～100μg·mL^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系（r=0.9989），日内RSD为2.3%～7.4%；日间RSD为8.0%～14.5%；萃取回收率为98.4%；白花前胡甲素在肝微粒体中呈线性消除，消除速率不随药物底物浓度的增加而增加，t_1/2为（41.74±10.71）min；C_max为（57.22±3.27）μg·mL^-1；CL为（0.0034±0.0199）mL·（min·mg）^-1。白花前胡甲素与大鼠血浆蛋白的结合率范围为80.23%～92.83%。结论本文建立的LC-MS方法操作简单、灵敏、特异，结果准确，适合用于白花前胡甲素大鼠体内药代动力学研究。白花前胡甲素吸收慢，生物利用度高。

制备 ^[4]

利于大生产操作、产品纯度高的白花前胡甲素的制备方法。采用下列技术方案：取白花前胡全草粗粉，加入到CO2超临界萃取器中，萃取压力10-40MPa，温度30-60℃，CO2流量1-5ml/g生药/min，萃取时间150-250min，得萃取物，得油状物，冷藏，析出结晶，分离结晶，石油醚洗涤，加入无水乙醇重结晶，分离、洗涤、干燥即得。

主要参考资料

[1] CN201310726365.8 白花前胡甲素微乳及其制备方法

[2] 白花前胡甲素的药理作用研究进展

[3] 白花前胡甲素的药代动力学研究

[4] CN200910233828.0 一种白花前胡甲素的制备方法