人急性淋巴母细胞性白血病细胞的应用

背景^[1-3]

人急性淋巴母细胞性白血病细胞从一位复发病人的细胞中建立。这个病人接受过多种药物联合前期化疗。p53基因的248位密码子有一个G->A突变。P53不表达。不生成免疫球蛋白或EB病毒。MOLT-4与MOLT-3来源于同一位病人。曾受支原体污染，但用抗生素去除。MOLT-4与MOLT-3来源于一名19岁的男性急性淋巴细胞性白血病的复发患者，该患者前期接受过多种药物联合化疗。MOLT-4细胞系为T淋巴细胞起源，p53基因的第248位密码子有一个G→A突变，不表达p53，不表达免疫球蛋白或EB病毒；可产生高水平的末端脱氧核糖转移酶；CD1(49%),CD2(35%),CD3A(26%)B(33%)C(34%),CD4(55%),CD5(72%),CD6(22%),CD7(77%)。

人急性淋巴母细胞性白血病细胞

人急性淋巴母细胞性白血病细胞培养步骤

一．人急性淋巴母细胞性白血病细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640（推荐iCell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；β－巯基乙醇，0.05mM；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%，即可进行传代培养。

1.将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，补加培养基至6ml，放入培养箱继续培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

应用^[4][5]

人急性淋巴母细胞性白血病细胞可以用于急性淋巴细胞性白血病细胞株中T-型钙通道和钠通道的达与功能

研究T-型钙通道及电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞和正常淋巴细胞中的表达,并对其功能进行研究。

方法:运用RT-PCR、Q-PCR、western blotting、免疫荧光和全细胞膜片钳技术研究T-型钙通道及电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞和正常淋巴细胞中的表达。利用细胞增殖实验和si RNA技术观察T-型钙通道在急性淋巴细胞性白血病细胞生长中的作用。细胞周期和细胞凋亡实验观察T-型钙通道阻断剂对细胞周期和凋亡的影响。流式细胞技术观察T-型钙通道阻断剂对胞内钙稳态和内质网钙库释放的影响。线粒体膜电位测定观察T-型钙通道阻断剂对线粒体膜电位的影响及内质网-线粒体钙流动在线粒体膜电位去极化中的作用。Western blotting技术探讨T-型钙通道阻断剂对ERK信号通道的影响。利用细胞侵袭实验研究电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞迁移中的作用。

结果:(1)T-型钙通道在急性淋巴细胞性白血病细胞中有表达,而正常外周血淋巴细胞不表达。

(2) T-型钙通道在急性淋巴细胞性白血病细胞增殖中发挥重要的作用。

(3) T-型钙通道阻断剂-米贝拉地尔(mibefradil)和NNC-55-0396浓度依赖性地抑制急性淋巴细胞性白血病细胞的生长。

T-型钙通道阻断剂对细胞的生长具有双重影响:(i)抑制细胞增殖,通过阻断G1-S期转折;(ii)诱导细胞凋亡。

(4) T-型钙通道阻断剂破坏急性淋巴细胞性白血病细胞胞内的钙稳态并诱导内质网钙释放,与细胞凋亡密切相关。

(5) T-型钙通道阻断剂-NNC-55-0396可以引起急性淋巴细胞性白血病细胞线粒体膜电位去极化,而内质网-线粒体钙流动没有直接参与线粒体膜电位的去极化。

(6) 米贝拉地尔和NNC-55-0396能够抑制MOLT-4细胞的ERK1/2磷酸化。

(7) 电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞和正常外周血淋巴细胞都有表达,且表达亚型以TTX-敏感性钠通道为主。

(8) 电压门控钠通道特异性阻断剂TTX抑制急性淋巴细胞性白血病细胞的侵袭能力。

结论:(1)T-型钙通道在急性淋巴细胞性白血病细胞增殖中发挥重要的作用。

(2) 米贝拉地尔和NNC-55-0396在表达T-型钙通道的急性淋巴细胞性白血病细胞中具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,这将为白血病的治疗带来新的靶点。

(3)电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞的侵袭中发挥着重要的作用。

参考文献

[1]T‐type calcium channel blockers inhibit autophagy and promote apoptosis of malignant melanoma cells[J].Arindam Das;;Charumathi Pushparaj;;Judit Herreros;;Mireia Nager;;Ramon Vilella;;Manuel Portero;;Reinald Pamplona;;Xavier Matias‐Guiu;;Rosa M.Martí;;Carles Cantí.Pigment Cell Melanoma Res,2013(6)

[2]Calcium Channels and Pumps in Cancer:Changes and Consequences[J].Gregory R.Monteith;;Felicity M.Davis;;Sarah J.Roberts-Thomson.Journal of Biological Chemistry,2012(38)

[3]Inhibition of T-type calcium channels disrupts Akt signaling and promotes apoptosis in glioblastoma cells[J].Nicholas C.K.Valerie;;Barbara Dziegielewska;;Amol S.Hosing;;Ewa Augustin;;Lloyd S.Gray;;David L.Brautigan;;James M.Larner;;Jaroslaw Dziegielewski.Biochemical Pharmacology,2012

[4]T-type voltage-activated calcium channel Cav3.1,but not Cav3.2,isinvolved in the inhibition of proliferation and apoptosis in MCF-7 human breastcancer cells[J].Tsuyako Ohkubo;;Jun Yamazaki.International Journal of Oncology,2012(1)

[5]黄伟锋.急性淋巴细胞性白血病细胞株中T-型钙通道和钠通道的达与功能[D].福建医科大学,2015.