U-937人组织细胞淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

U-937人组织细胞淋巴瘤细胞是由Nilsson K实验室于1974年从一名37岁的患有恶性组织细胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分离建立的。1979年来的研究显示该细胞在人混合淋巴细胞培养物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和维A酸的诱导下可以向终末单核细胞分化。该细胞不合成免疫球蛋白，EBV阴性；可产生溶菌酶、β-2-微球蛋白，受PMA刺激后可产生TNF-α；表达C3R；可作转染宿主；表达Fas，对TNF和抗Fas的抗体敏感。

U-937人组织细胞淋巴瘤细胞

接收后处理：

接收到细胞后，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，补加培养基至6ml，放入培养箱继续培养。次传代推荐传代密度为1:2。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

应用^[4][5]

用于单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）体外趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的实验研究

1. 模拟肿瘤微环境,检测单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在体外对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的趋化作用；2.为研究单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在胶质瘤微环境中趋化肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中的作用提供实验依据。

[方法]1.人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）复苏、原代培养及传代培养；

2. 单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）加入[ranswell小室下室,人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）接种到Transwell小室上室,进行体外趋化实验；

3. 碳酸聚酯膜冲洗、固定、HE染色,镜下阅片观察趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）数量；

4. 血球计数板计数趋化细胞离心浓缩液中人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）数量,检测单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的能力；

5. 实验数据应用SPSS17.0统计软件进行分析.实验数据以均数±标准差（x±S）表示,统计学检验方法为单因素方差分析（one-way AVONA）,P<0.05差异有统计学意义。

[结果]1.单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的趋化作用高于空白对照组,有显著性差异,差异有统计学意义（P<0.05）；2.单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的趋化能力和浓度相关,随着浓度增加,对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的趋化作用越明显（P<0.05）。

[结论]单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）具有趋化作用,不同浓度单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）趋化活性存在差异,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）浓度越大,对人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的促迁移作用越明显。

参考文献

[1]Induced expression of B7-H3 on the lung cancer cells and macrophages suppresses T-cell mediating anti-tumor immune response[J].Cheng Chen,Yu Shen,Qiu-Xia Qu,Xu-Qin Chen,Xue-Guang Zhang,Jian-An Huang.Experimental Cell Research.2013(1)

[2]Tumor-associated macrophages and the profile of inflammatory cytokines in oral squamous cell carcinoma[J].Oral Oncology.2012

[3]The effect of vascular endothelial growth factor C expression in tumor-associatedmacrophages on lymphangiogenesis and lymphatic metastasis in breast cancer[J].Mingxing Ding,Xiaoyan Fu,Haidong Tan,Ruiquan Wang,Zhimei Chen,Shiping Ding.Molecular Medicine Reports.2012(5)

[4]Tumor‐associated macrophages promote angiogenesis and lymphangiogenesis of gastric cancer[J].Hui Wu,Jian‐Bo Xu,Yu‐Long He,Jian‐Jun Peng,Xin‐Hua Zhang,Chuang‐Qi CHEN,Wen Li,Shi‐Rong Cai.J.Surg.Oncol..2012(4)

[5]于谦.单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）体外趋化人组织细胞淋巴瘤细胞（U937）的实验研究[D].昆明医科大学,2016.