人白细胞介素-2(IL-2)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人白细胞介素-2(IL-2)ELISA KIT是基于经典的双抗夹心ELISA方法，利用HRP偶联的抗体，催化TMB产生颜色物质，基于标准曲线，计算出样品中人白介素2的含量。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中人白介素2(IL-2)水平。用纯化的人白介素2(IL-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人白介素2(IL-2)，再与HRP标记的人白介素2(IL-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白介素2(IL-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白介素2(IL-2)浓度。

人白细胞介素-2(IL-2)ELISA KIT

【操作步骤】

1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。10个标准孔,1个空白对照

3、标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。

4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒弃去,如此重复5次,拍干。

7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

9、洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。

10、显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

11、终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

12、读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于血清白细胞介素-2和白细胞介素-4水平与卒中后抑郁的相关性研究

探讨PSD的病因学提供了方向,即PSD患者体内可能存在炎性细胞因子分泌失衡。研究显示,各种细胞因子如白细胞介素（interleukin,IL）-1?IL-2?IL-6及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）等与PSD存在密切的相关性;这些细胞因子不仅可以有效地调节机体免疫状态,还能对神经递质分泌、合成及生理代谢等过程产生明显影响,在卒中后的抑郁发病机制中起着重要作用。

炎症细胞因子的分泌失衡在在PSD的发生发展中扮演者重要的角色。各项研究显示,包括IL-1?IL-2?IL-6及TNF-α等在内的炎症因子与PSD联系较为紧密;这些炎症因子在调节免疫反应的同时,同时影响神经递质的产生以及分泌,并进而对卒中后抑郁产生造成影响。目前,临床上尚无可靠的生物学指标来预测PSD的发生。

研究通过对比PSD患者与非PSD脑梗死患者血清IL-2和IL-4水平,探讨血清IL-2和IL-4水平与PSD的相关性。目的测量脑梗死患者急性期血清白介素-2（interleukin-2,IL-2）白介素-4（Interleukin-4,IL-4）的水平,观察后期出现卒中后抑郁（post-stroke depression,PSD）的情况,研究炎症因子与PSD的关系。

方法:病例组为按照我国急性脑梗死诊断指南中的诊断标准,且均经头颅MRI或CT检查证实的脑梗死患者80例,卒中发生后3个月内进行连续随访,观察是否发生PSD。纳入的研究者均按照PSD的诊断标准及汉密尔顿抑郁量表-17（Hamilton Depression Scale,HAMD-17）进行连续随访。最终根据随访结果将纳入的脑梗死患者分为卒中后抑郁组（PSD组）和非卒中后抑郁组（non-PSD组）;PSD组根据得分高低分为轻度和中重度两个亚组。

另外选取同期门诊体检者40例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清中IL-2和IL-4水平,比较不同组间各指标的差异。急性期脑梗死神经功能缺损评分按照美国国立卫生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale,NIHSS）,分析神经功能缺损评分与PSD的之间的相关性。

参考文献

[1]An analysis of depressive symptoms in stroke survivors:verification of a moderating effect of demographic characteristics[J].Eun-Young Park,Jung-Hee Kim.BMC Psychiatry.2017(1)

[2]Deletion of the P2X4 receptor is neuroprotective acutely,but induces a depressive phenotype during recovery from ischemic stroke[J].Rajkumar Verma,Chunxia G.Cronin,Jacob Hudobenko,Venugopal R.Venna,Louise D.McCullough,Bruce T.Liang.Brain Behavior and Immunity.2017

[3]Depressive disorder may be associated with raphe nuclei lesions in patients with brainstem infarction[J].Yoshiyuki Numasawa,Takaaki Hattori,Sumio Ishiai,Zen Kobayashi,Tomoyuki Kamata,Minoru Kotera,Satoru Ishibashi,Nobuo Sanjo,Hidehiro Mizusawa,Takanori Yokota.Journal of Affective Disorders.2017

[4]Repetitive transcranial magnetic stimulation for the treatment of post-stroke depression:A systematic review and meta-analysis of randomized controlled clinical trials[J].XinYi Shen,MingYi Liu,Yu Cheng,Cui Jia,XinYue Pan,QingYun Gou,XinLian Liu,Hui Cao,LuShun Zhang.Journal of Affective Disorders.2017

[5]张乾坤.血清白细胞介素-2和白细胞介素-4水平与卒中后抑郁的相关性研究[D].新乡医学院,2019.