人17羟孕酮(17-OHP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人17羟孕酮(17-OHP)ELISA KIT是利用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）的方法检测样本中17羟孕酮(17-OHP)的水平。

原理：已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

人17羟孕酮(17-OHP)ELISA KIT

操作步骤：

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于高危新生儿中17α-羟孕酮（17α-OHP）水平的研究

分析高危因素包括出生体重、胎龄及其他高危因素对新生儿17α-OHP水平分布,为新生儿肾上腺皮质增生症（CAH）筛查切值的优化提供参考。

方法：运用非参数检验Wilcoxon检验比较性别、胎龄和体重各组之间的统计学差异,通过同时固定性别、胎龄和体重三因素,分析其他高危因素对新生儿17α-OHP水平的影响。

结果新生儿17α-OHP水平呈正偏态分布,高危新生儿17α-OHP水平（中位数为8.52nmol/L）显著高于正常新生儿17α-OHP水平（中位数为6.27 nmol/L）,Wilcoxon=1.43×108,P=0.000。男性新生儿17α-OHP水平（中位数为6.81 nmol/L）显著高于女性新生儿17α-OHP水平（中位数为6.33 nmol/L）,Wilcoxon=3.77×108,P=0.000,但不是独立影响因素。

早产新生儿17α-OHP水平（中位数为11.40 nmol/L）显著高于足月新生儿17α-OHP水平（中位数为6.36 nmol/L）,Wilcoxon=4.40×108,P=0.000;通过对是否高危、性别和体重同时分层比较表明早产新生儿17α-OHP水平均显著高于足月新生儿17α-OHP水平。

不同出生体重新生儿17α-OHP水平不同,极低出生体重新生儿17α-OHP水平（中位数为13.15 nmol/L）显著高于低出生体重新生儿17α-OHP水平（中位数为10.60 nmol/L）,Wilcoxon=2.42×105,P=0.000;

低出生体重新生儿17α-OHP水平显著高于正常出生体重新生儿17α-OHP水平（中位数为6.43 nmol/L）,Wilcoxon=6.77×108,P=0.000;正常出生体重新生儿17α-OHP水平显著高于巨大出生体重新生儿17α-OHP水平（中位数为6.25 nmol/L）。

参考文献

[1]Neonatal screening for congenital adrenal hyperplasia:17-hydroxyprogesterone levels and CYP21 genotypes in preterm infants.Nordenstrm A,Wedell A,Hagenfeldt L,Marcus C,Larsson A.Pediatrics.2001

[2]Weight-adjusted neonatal 17OH-progesterone cutoff levels improve the efficiency of newborn screening for congenital adrenal hyperplasia.Giselle Hayashi,Claudia Faure,Maria Fernanda Brondi.ARQUIVOS BRASILEIROS DE ENDOCRINOLOGIA E METABOLOGIA.2011

[3]Management of congenital adrenal hyperplasia in childhood.Kim Mimi S,Ryabets-Lienhard Anna,Geffner Mitchell E.Current opinion in endocrinology,diabetes,and obesity.2012

[4]Congenitaladrenal hyperplasia newborn screening:Rio de Janeiro experience.Cardoso C B,Fonseca A A,De Oliveira M F,et al.Arq Bras Endocrinol Metabol.2005

[5]朱芹,王本敬,张芹,陈亚平,陈瑛.高危新生儿中17α-羟孕酮(17α-OHP)水平的研究[J].中国优生与遗传杂志,2014,22(09):119-123.