小鼠骨肉瘤成骨细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠骨肉瘤成骨细胞是来源于小鼠的成骨细胞样BALB/c贴壁细胞。细胞抗原表达：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2 wt[K7M2-WT]细胞骨家族细胞特性。

小鼠骨肉瘤成骨细胞可在无血清的状态下培养。对于小鼠骨肉瘤成骨细胞中的肿瘤干细胞相关亚群可以进行筛选和鉴定骨肉瘤细胞系。方法通过无血清悬浮培养初步富集小鼠骨肉瘤成骨细胞肿瘤干细胞，观察其形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态，并在有血清培养基中诱导其分化。

小鼠骨肉瘤成骨细胞

细胞培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于Runx2基因对骨肉瘤细胞的生物学的影响及相关体内和体外机制的研究

探讨干扰或转染Runx2基因后对小鼠骨肉瘤细胞K7M2、K7和人骨肉瘤细胞株HOS体外,体内生物学活性的影响。

方法:将Runx2和si Runx2转染到骨肉瘤细胞中,观察细胞变化。加入IL-6抗体后检测培养上清和细胞的变化。将上述细胞注射到BALB/C小鼠体内,待小鼠成瘤后观察小鼠的成瘤率、肺转移率、生存率及生存周期,同时观察各组骨破坏的程度。

结果:si Runx2可以抑制细胞体外增殖,Runx2作用相反。转染Runx2可提高培养上清液的IL-6,同时提高RANKL表达,而si Runx2结果相反。体内试验发现si Runx2明显抑制肿瘤生长和转移,还能减轻骨质破坏的程度。

结论:干扰Runx2基因表达对骨肉瘤有明显的治疗效果。

参考文献

[1]Comparative expression of RANK,RANKL,and OPG in keratocystic odontogenic tumors,ameloblastomas,and dentigerous cysts[J].Oral Surgery,Oral Medicine,Oral Pathology,Oral Radiology and Endodontology.2008(3)

[2]Tumor-associated osteoclast activity and aggressiveness of osteosarcoma[J].Sofia Avnet,Alessandra Longhi,Manuela Salerno,Jussi Halleen,Francesca Perut,Donatella Granchi,Armando Giunti,Nicola Baldini.Bone.2008

[3]The role of Dkk-1 in human osteosarcoma and its regulation[J].Helen S.McCarthy,John H.H.Williams,Michael J.Marshall.Bone.2008

[4]A review of clinical and molecular prognostic factors in osteosarcoma[J].Jonathan C.M.Clark,Crispin R.Dass,Peter F.M.Choong.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2008(3)

[5]吴丹凯.Runx2基因对骨肉瘤细胞的生物学的影响及相关体内和体外机制的研究[D].吉林大学,2008.