瑞氏-姬姆萨染色之缓冲液的使用

看出来他们染色的差异了吗？A图细胞染色整体非常的艳丽鲜红（缓冲液pH6.4），B图细胞染色程度适中（缓冲液pH6.8），C图细胞染色整体灰蓝染（缓冲液pH7.4）。

这种染色鲜艳程度的差异，不仅出现在我们临床操作中，我们去查找不同的参考书、不同的图谱，细心留意都会发现这种差异。

那究竟是什么原因引起的差异呢？

答案就是我们使用的染色缓冲液！

瑞氏-姬姆萨染色法是在1902年被提出的，但缓冲液的使用是1920年Majunkin才提及。瑞氏姬姆萨复合染色使用的缓冲液是磷酸盐缓冲液。

缓冲液有两个指标会影响到染色的效果，一个是pH值，一个是离子强度，也就是摩尔浓度。

一、pH值

细胞中大部分蛋白质都是两性电解质，所带的电荷会随环境pH值改变而改变。对某一种蛋白，如果缓冲液pH<pI(蛋白质的等电点)，蛋白就会带正电荷，容易与酸性伊红结合。简单说就是使用酸性缓冲液，细胞容易染成鲜红色。相反，如果缓冲液pH>pI(蛋白质的等电点)，蛋白就会带负电荷，容易与美蓝天青颗粒结合。简单说就是使用碱性缓冲液，细胞溶液染成灰蓝色。

那为了适度染色，避免过度鲜红或者灰蓝所带来判读的干扰，实验证明缓冲液的pH值应该在6.4~6.8之间。

二、离子强度

离子强度（摩尔浓度），更直白的说就是稀释程度。1920年Majunkin提出使用缓冲液配合染色，当时提出的浓度是0.057mol/L，但后人的报道发现，此浓度的缓冲液染色时间长，容易产生染色沉渣，染色效果不理想，并提出低离子浓度方案（<0.033mol/L）。

高浓度缓冲液导致染色不良，主要是因为缓冲液中的离子与染料中的离子竞争性结合，使细胞着色变慢，我们需要延长染色时间。另外，这些离子结合后更容易析出形成沉渣，影响染色效果。

背景大量沉渣颗粒

解决方案，配制浓度合适的缓冲盐溶液，并且使用盐酸调整缓冲液的pH值。

比如我们使用的这种商品化的缓冲盐，按说明书推荐的蒸馏水量加倍稀释，使用pH试纸测试pH值，并使用盐酸调整。

参考文献：

1 梁维岗，李喜萍，樊菊娥. 血细胞姬姆萨瑞氏染色法中使用缓冲液的探讨,临床检验杂志，1996.14(6):318-319

2 Majunkin, F A. JAMA, 1920.74:17