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瑞氏-姬姆萨染色之缓冲液的使用

发布日期:2021/2/8 11:42:06

血涂片在我们临床上做的非常多,但大家有没有遇到过一下的几种情况呢?

看出来他们染色的差异了吗?A图细胞染色整体非常的艳丽鲜红(缓冲液pH6.4),B图细胞染色程度适中(缓冲液pH6.8),C图细胞染色整体灰蓝染(缓冲液pH7.4)。

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这种染色鲜艳程度的差异,不仅出现在我们临床操作中,我们去查找不同的参考书、不同的图谱,细心留意都会发现这种差异。

那究竟是什么原因引起的差异呢?

答案就是我们使用的染色缓冲液!

瑞氏-姬姆萨染色法是在1902年被提出的,但缓冲液的使用是1920年Majunkin才提及。瑞氏姬姆萨复合染色使用的缓冲液是磷酸盐缓冲液。

缓冲液有两个指标会影响到染色的效果,一个是pH值,一个是离子强度,也就是摩尔浓度。

一、pH值

细胞中大部分蛋白质都是两性电解质,所带的电荷会随环境pH值改变而改变。对某一种蛋白,如果缓冲液pH<pI(蛋白质的等电点),蛋白就会带正电荷,容易与酸性伊红结合。简单说就是使用酸性缓冲液,细胞容易染成鲜红色。相反,如果缓冲液pH>pI(蛋白质的等电点),蛋白就会带负电荷,容易与美蓝天青颗粒结合。简单说就是使用碱性缓冲液,细胞溶液染成灰蓝色。

那为了适度染色,避免过度鲜红或者灰蓝所带来判读的干扰,实验证明缓冲液的pH值应该在6.4~6.8之间。

二、离子强度

离子强度(摩尔浓度),更直白的说就是稀释程度。1920年Majunkin提出使用缓冲液配合染色,当时提出的浓度是0.057mol/L,但后人的报道发现,此浓度的缓冲液染色时间长,容易产生染色沉渣,染色效果不理想,并提出低离子浓度方案(<0.033mol/L)。

高浓度缓冲液导致染色不良,主要是因为缓冲液中的离子与染料中的离子竞争性结合,使细胞着色变慢,我们需要延长染色时间。另外,这些离子结合后更容易析出形成沉渣,影响染色效果。

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背景大量沉渣颗粒

解决方案,配制浓度合适的缓冲盐溶液,并且使用盐酸调整缓冲液的pH值。

比如我们使用的这种商品化的缓冲盐,按说明书推荐的蒸馏水量加倍稀释,使用pH试纸测试pH值,并使用盐酸调整。

参考文献:

1 梁维岗,李喜萍,樊菊娥. 血细胞姬姆萨瑞氏染色法中使用缓冲液的探讨,临床检验杂志,1996.14(6):318-319

2 Majunkin, F A. JAMA, 1920.74:17

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