一种高效液相色谱测定二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）含量的方法

背景技术

二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）属于合成磷脂，广泛应用于药用辅料，适合用于改进制剂处方，并制备成多种多样的脂质体和磷脂复合物。二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱已应用于Visudyne(维替泊芬脂质体)和Abelect(两性霉素β磷脂复合物)，已收录于美国食品药品管理局非活性药用成分(辅料)数据库，其质量标准未收载于中国药典、美国药典、欧洲药典中。目前国内外文献尚无二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）含量测定方法。

二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）一般可通过化学合成法制得。常用的工业方法使用肉豆蔻酸(十四酸)和磷酸酰胆碱为起始原料，通过缩合反应，并加以提纯精制制备。该制备工艺中，肉豆蔻酸为起始原料，也是产物的降解产物。此外，反应中会产生副产物溶血磷脂酰胆碱，同时也是产物降解过程中易产生的化合物。这两种化合物会干扰二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）含量检测的准确性。开发能够分离二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）和其有关物质的含量检测方法是非常有必要的。

目前国内外其它磷脂酰胆碱类化合物的含量检测有TLC法、以紫外检测器检测的液相色谱法、以ELSD检测器检测的液相正相色谱法等。TLC法无法准确定量检测，且人为主观性较大，故含量检测误差较大，无法准确的检测产品含量。因磷脂类化合物几乎无紫外吸收，故以紫外检测器检测的液相色谱法，检测波长一般选择190~210nm之间，该检测波长下流动相所用溶剂等干扰较大，样品响应值也较低，含量检测的重复性及准确性都较差。中国药典中大豆磷脂及蛋黄卵磷脂的质量标准中，磷脂酰胆碱的含量检测以ELSD检测器，用硅胶为填充剂的色谱柱，以正己烷、异丙醇、甲醇等为溶剂的正相色谱法检测，该方法对色谱柱及仪器的损害较大。且以上磷脂或磷脂酰胆碱类化合物含量的检测均未有专门针对二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）的含量检测。

检测方法

实验材料：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）对照品(Lipoid含量99.6％)、溶血磷脂酰胆碱(江苏东南纳米材料有限公司)、肉豆蔻酸(凌峰化学)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）(江苏东南纳米材料有限公司)、色谱甲醇(TEDIA)、醋酸铵(凌峰化学)。

液相色谱条件：色谱柱采用Agilent Eclipse Plus C18柱(4.6*150mm，3.5μm)；以4mmol/L pH＝4的醋酸铵缓冲溶液为流动相A，以4mmol/L醋酸铵甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱；柱温40℃；蒸发光散射检测器，温度70℃，氮气流速为每分钟1.8L。

实验过程：取本品约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱对照品适量，用甲醇稀释制成每1mL中含二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg、0.07mg的溶液作为标准溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图。由标准溶液测得的线性回归方程计算二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）的含量。

参考文献

[1]江苏东南纳米材料有限公司. 一种高效液相色谱测定二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱含量的方法:CN202011362323.7[P]. 2021-04-09.