大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)的应用

背景^[1-3]

大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)是一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，多用于微生物菌落计数培养。成分(g/L)：胰蛋白胨15.0g、大豆胨5.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、PH值7.3±0.2。胰酪胨（酪蛋白胰酶水解物）、大豆木瓜蛋白酶水解物提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：称取本品40克，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟备用。

活菌计数法又称间接计数法。活菌计数法是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌，经过一定时间培养后，取样进行活菌计数。

活菌计数是将定量的药物与试验菌作用后的混合液稀释后加入琼脂培养基，制成平板，培养后数平板上形成的菌落数。直接计数法测定到的是死、活细胞总数，而间接计数法测得的仅是活菌总数。这类方法所得的数值往往比直接计数法测得的数值小。

菌落特征比较：

细菌：湿润，粘稠，易挑起

放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素

酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚

霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，

无固定大小，多有光泽，不易挑起

细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑

放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。

酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。

霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。

应用^[4][5]

用于兔肺白念珠菌病诊断的实验研究

制做新西兰兔肺白念珠菌病动物模型。取患肺支气管冲洗液作定量培养，以病理结果为金标准，探讨支气管冲洗液菌落计数对兔肺白念珠菌病的诊断价值。

方法新西兰兔36只，随机分为实验组与对照组(各18只)，各组18只兔随机排序，实验组用气管注射法注射0.2ml含1×10~8白念珠菌菌液制作肺白念珠菌病动物模型。对照组同方法注射0.2ml生理盐水。接种后每天按序处死动物，留取肺组织做病理。

同时收集支气管冲洗液(BLF)做菌落计数培养，观察菌落计数与病理结果的一致性。接种前和处死前做肺CT扫描，观察菌落计数与X线影像显示是否感染、感染轻重的关系。

结果：支气管冲洗液(BLF)菌落计数培养与病理诊断有良好的一致性。以10~4cfu／ml为界值，敏感性为53.1％，特异性为95.2％；以10~3cfu／ml为界值，敏感性为78.1％，特异性为87.5％。BLF菌落计数随影像严重程度增加而增加，X~2=35.58，p＜0.005。

结论BLF菌落计数培养对兔白念珠菌病诊断与病理有良好的一致性。为避免误诊可选择以1×10~4cfu／ml为界值，避免漏诊可选择1×10~3cfu／ml为界值。BLF菌落计数有随影像严重程度增加而增加的趋势。

参考文献

[1] Semiquantitative polymerase chain reaction enzyme immunoassay for diagnosis of disseminated Candidiasis[J].J.P.Burnie,N.Golbang,R.C.Matthews.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases.1997(5)

[2] Counting pollen grains using readily available,free image processing and analysis software.Costa Clayton M,Yang Suann.Annals of Botany.2009

[3] Image segmentation of ovitraps for automatic counting of Aedes Aegypti eggs.Mello Carlos A B,dos Santos Wellington P,Rodrigues Marco A B,Candeias Ana Lúcia B,Gusm?o Cristine M G.Conference proceedings:...Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society.IEEE Engineering in Medicine and Biology Society.Conference.2009

[4] On the accurate counting of tumor cells.Fang,Bin,Hsu,Wynne,Lee,Mong Li.IEEE Transactions on Nanobioscience.2003

[5]杨艳平.兔肺白念珠菌病诊断的实验研究[D].山东大学,2006.