大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

大鼠S100蛋白(S-100)是S100蛋白质家族的成员，该蛋白质包含2个EF手钙结合基序。S100蛋白位于大量细胞的细胞质和/或细胞核中，并参与许多细胞过程的调控，例如细胞周期进程和分化。S100基因包括至少13个成簇排列在1q21号染色体上的成员。但是，该基因位于21q22.3。该蛋白可能在神经突延伸，黑色素瘤细胞增殖，Ca2+通量的刺激，PKC介导的磷酸化，星形胶质细胞增多和轴突增殖以及微管组装的抑制中起作用。该基因的染色体重排和表达的改变与多种神经系统疾病，赘生性疾病和其他类型的疾病有关，包括阿尔茨海默氏病，

应用^[4][5]

用于大鼠骨髓基质细胞在体外条件诱导下向Schwann细胞分化的基础研究

大鼠骨髓基质细胞在体外诱导的过程中,MSCs的形态变化以及表达Schwann细胞的标记蛋白S100B蛋白的变化。从成年SD大鼠的股骨和胫骨中分离培养MSCs。采用MTT法检测细胞的活力,FCM检测细胞周期和CD分子等方法研究MSCs的特性。结果证明MSCs在体外易扩增,传1—8代以内的细胞增殖能力无明显变化。未经诱导的MSCs大部分处于G0/G1期,G0/G1期的细胞所占百分比平均高于80%;骨髓基质细胞CD29（+）,CD11b（-）,CD90（+）。

本实验应用复合诱导因子BME,RA,FSK,bFGF,PDGF,HRG体外连续诱导MSCs向Schwann细胞样细胞分化。诱导分化后采用免疫荧光细胞化学染色,流式细胞仪,Western Blot，ELISA和逆转录PCR方法分别检测检测Schwann细胞的标记蛋白S100蛋白及其mRNA的表达。结果发现诱导分化后的MSCs形态上发生了类似Schwann细胞样细胞的变化。MSCs在诱导过程中S100的mRNA有上升的趋势;通过免疫荧光方法观察到诱导后MSCs表达S100蛋白增强;我们又通过Western Blot和流式细胞仪进一步定量检测到MSCs表达S100蛋白增高。又因为大多数的研究观察了细胞形态以及几种神经相关蛋白的免疫反应,也有报道用基因组学方法分析MSCs诱导过程中基因谱的表达变化。

参考文献

[1]Schwann cells induce neuronal differentiation of bone marrow stromal cells[J].Mercedes Zurita,Jesús Vaquero,Santiago Oya,Miriam Miguel.NeuroReport.2005(5)

[2]Hsp90 Activation and Cell Cycle Regulation[J].Francis Burrows,Hong Zhang,Adeela Kamal.Cell Cycle.2004(12)

[3]Marrow Stromal Cell Transplantation after Traumatic Brain Injury Promotes Cellular Proliferation within the Brain[J].Asim Mahmood,Dunyue Lu,Michael Chopp.Neurosurgery.2004(5)

[4]Therapeutic and diagnostic implications of Hsp90 activation[J].Adeela Kamal,Marcus F Boehm,Francis J Burrows.Trends in Molecular Medicine.2004(6)

[5]李文婷.大鼠骨髓基质细胞在体外条件诱导下向Schwann细胞分化的基础研究[D].中国协和医科大学,2006.