人细胞色素B561(CYTB561)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人细胞色素B561(CYTB561)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中细胞色素b561(cytb561)水平。用纯化的细胞色素b561(cytb561)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入细胞色素b561(cytb561)，再与HRP标记的细胞色素b561(cytb561)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞色素b561(cytb561)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中细胞色素b561(cytb561)浓度。

细胞色素一类以铁卟啉（或血红素）作为辅基的电子传递蛋白，广泛参与动、植物，酵母以及好氧菌、厌氧光合菌等的氧化还原反应。细胞色素作为电子载体传递电子的方式是通过其血红素辅基中铁原子的还原态(Fe2+)和氧化态（Fe3+）之间的可逆变化。任何一类细胞蛋白（血红素蛋白），在细胞能量转移中起着极为重要的作用。

细胞色素可按其吸收的光的波长分为3类，已鉴定出至少30种不同的细胞色素。卟啉环以四个配价键与铁原子相连，形成四配位体螯合的络合物，一般称为血红素。根据血红素辅基的不同结构,可将细胞色素分为a、b、c和d类。b类细胞色素的辅基是原血红素即铁-原卟啉Ⅸ。卟啉环上的侧链取代基为4个甲基,两个乙烯基和两个丙酸基与血红蛋白、肌红蛋白辅基的结构相同。

应用^[4][5]

用于人CYP3A4与POR及cyt b5共表达条件的优化以及表达产物在药物相互作用研究

人细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)是一大类含有血红素分子的单加氧酶超家族,对外源及内源性的物质代谢以及环境致癌物的活化都起着至关重要的作用。细胞色素P450中主要负责药物代谢的酶有3个家族：CYP1,CYP2和CYP3,包括了：CYP1A2、CYP2A6、CYP2A13、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6.CYP2E1和CYP3A4等。

在人体内众多的CYP450中,CYP3A4是人肝脏中含量最丰富,也是与药物代谢最为相关的一类酶。CYP3A4代谢了大约50%的临床药物,具有广泛的代谢底物谱,并且底物结构和亲和力具有多样性。睾酮和咪达唑仑是CYP3A4活性鉴定的首选经典底物。CYP3A4催化的典型代谢途径有C-氧化,如尼古丁(nicotine);N-氧化,如伏立康唑(voriconazole);N-脱烷基,如芬太尼(fentanyl);O-脱烷基,如氟西汀(fluoxetine);脱氢,如溴哌利多(bromperidol)和氟哌啶醇(haloperidol);硝基还原,如氯硝西泮(clonazepam)和C-羟化,如特非那定(terfenadine)(Guergerich FPetal.,1999)。

人细胞色素P450氧化还原酶(cytochrome P450oxidoreductase,POR)是一个锚定在内质网膜上的重要黄素蛋白(Williams CH et al.,1962;Phillips AH et al.,1962;Pandey AV et al.,2010;Miller WL et al.,2011),能通过其FMN与FAD辅基将NADPH上的电子传递给CYP450,以实现CYP450对底物的氧化功能。

参考文献

[1]High-throughput inhibition screening of major human cytochrome P450 enzymes using an in vitro cocktail and liquid chromatography-tandem mass spectrometry.Testino SA Jr,Patonay G.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2003

[2]Evaluation of cytochrome P450 probe substrates commonly used by the pharmaceutical industry to study in vitro drug interactions.Yuan R,Madani S,Wei X X,Reynolds K,Huang S M.Drug Metabolism and Disposition.2002

[3]The conduct of in vitro and in vivo drug-drug interaction studies:a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America(PhRMA)perspective.Bjornsson TD,Callaghan JT,Einolf HJ,et al.Drug Metabolism and Disposition.2003

[4]Cytochrome P-450 3A4:regulation and role in drug metabolism.Guengerich FP.Annual Review of Pharmacology and Toxicology.1999

[5]谢章明.人CYP3A4与POR及cyt b_5共表达条件的优化以及表达产物在药物相互作用研究中的应用[D].浙江大学,2013.