标准豚鼠血清(碳吸附过滤)的应用

背景^[1-4]

标准豚鼠血清(碳吸附过滤)是豚鼠血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。

标准豚鼠血清(碳吸附过滤)经无菌采集、批量混合，最终过3次0．1um过滤分装而成在经过生物碳吸附补体等有害物质。标准豚鼠血清(碳吸附过滤)适合于单抗研制、较常规的原代和传代细胞培养、规模化培养的疫苗生产。

碳吸附型血清是一款低水平类固醇类的血清产品，通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等，该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中对于那些需要这些分子的细胞培养，可能降低细胞生长性能。

标准豚鼠血清（碳吸附过滤）的保存应该注意：

(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。

(2)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

(3)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。

应用^[5][6]

标准豚鼠血清(碳吸附过滤)可用于三氯乙烯致敏豚鼠血清中相关细胞因子作用的研究

通过检测并比较不同组别以及时间段豚鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12的水平,研究细胞因子在TCE致敏豚鼠皮肤损伤中的作用,探讨三氯乙烯药疹样皮炎的皮肤损伤机制。

方法选用体重250～300g/只,白色雌性豚鼠,经适应性饲养一星期后,随机分成空白对照组、溶剂对照组(橄榄油)、TCE组和DNCB阳性对照组。定期测量豚鼠体重,监测豚鼠生长状况就健康状态;采用豚鼠反应试验(Guinea Pig Maximization Test,GPMT)方法建立豚鼠致敏模型,观察并记录豚鼠背部受试区的皮肤反应情况并进行拍照;依据《化学品毒性鉴定技术规范》中规定的皮肤反应评分标准对豚鼠皮肤反应进行评分;当受试样品组动物皮肤反应积分≥1时,为皮肤致敏反应阳性,该动物被划分为致敏组,反之被划分为未致敏组。分别在豚鼠皮肤致敏实验24h和72h后抽取豚鼠血液并处死动物,制备血清,采用豚鼠细胞因子ELISA试剂盒测定血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12的含量。用SPSS12.0统计软件包对实验结果进行统计分析。

结果1.在皮肤致敏反应试验中,空白组和橄榄油对照组均未见红斑或水肿,DNCB阳性对照组15只动物均出现红斑以及水肿反应,致敏率为100%;在TCE试验组的29只动物中有18只出现红斑,平均致敏率为62.1%。

2. 豚鼠血清中TNF-α和IL-1β检测结果:溶剂对照组TNF-α和IL-1β水平与空白对照组相比无统计学差异(P>0.05),而TCE 24h致敏组、TCE 72h致敏组、DNCB 24h组及DNCB 72h组血清TNF-α和IL-1β水平均较溶剂对照组高,且差异有统计学意义(P<0.05);TCE 24h实验组与TCE 72h实验组中,致敏组血清中TNF-α和IL-1β水平均较未致敏组高,且差异有统计学意义(P<0.05)。

3. 豚鼠血清中IL-6和IL-8检测结果:溶剂对照组IL-6和IL-8水平与空白对照组相比无统计学差异(P>0.05),且TCE 24h致敏组、TCE 72h致敏组、DNCB 24h组及DNCB 72h组血清IL-6和IL-8水平与溶剂对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);TCE 24h未致敏组IL-6水平较TCE 24h致敏组低,TCE 72h未致敏组IL-8水平较TCE 72h致敏组低,且差异均有统计学意义(P<0.05)。

4. 豚鼠血清中IL-10检测结果:溶剂对照组IL-10水平与空白对照组相比无统计学差异(P>0.05),与溶剂对照组相比较,TCE72h致敏组、TCE72h未致敏组及DNCB72h组血清IL-10水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);IL-10水平在TCE 24h致敏组与TCE 24h未致敏组、TCE 72h致敏组与TCE 72h未致敏组之间差异均无统计学意义(P>0.05);5.IL-12检测结果:溶剂对照组IL-10水平与空白对照组相比无统计学差异(P>0.05),与溶剂对照组相比较,各实验组(TCE24h致敏组、TCE24h未致敏组、TCE72h致敏组、TCE72h未致敏组、DNCB24h和DNCB72h组)血清IL-12水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);

结论1.TCE对豚鼠具有致敏作用,致敏率为62.1%。2.细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-12参与TCE皮肤致敏反应,并在TCE皮肤致敏反应中发挥重要作用。3.细胞因子IL-6和IL-8在TCE致敏反应的某个时间段中发挥了一定作用。

参考文献

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[6]汪亮.三氯乙烯致敏豚鼠血清中相关细胞因子作用的研究[D].安徽医科大学,2009.