标准豚鼠血清(碳吸附过滤)的应用

背景^[1-3]

标准豚鼠血清(碳吸附过滤)经无菌采集、批量混合，最终过3次0．1um过滤分装而成在经过生物碳吸附补体等有害物质。标准豚鼠血清(碳吸附过滤)适合于单抗研制、较常规的原代和传代细胞培养、规模化培养的疫苗生产。

血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

标准豚鼠血清(碳吸附过滤)功能:

提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。起酸碱度缓冲液作用。提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

应用^[4][5]

用于豚鼠诱导性多能干细胞样细胞的建立研究

以慢病毒为载体,以传统的四因子诱导法(oct4、sox2、klf4和c-myc)对分离的胎儿豚鼠成纤维细胞进行重编程,以获得重编程的豚鼠iPS细胞系,为后续建立动物疾病模型和药物筛选模型奠定基础。

实验结果如下：1.通过组织块贴壁法分别分离得到小鼠胚胎成纤维细胞和豚鼠胎儿成纤维细胞,两种细胞均可稳定传代。豚鼠胎儿成纤维细胞在病毒感染和多次传代后,细胞周期依旧正常,说明其可以作为重编程的靶细胞。

2. 使用四种不同转染试剂：磷酸钙法、脂质体2000、脂质体LTX和QuickShuttle-293试剂,通过三质粒共转染293T细胞,比较以上四种试剂对编码绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒载体的包装效率和对包装细胞的毒性作用,以及包装获得的病毒感染豚鼠胎儿成纤维细胞的能力。

通过流式细胞技术和MTT法分别检测阳性细胞数和细胞活性,最终显示了QuickShuttle-293转染试剂无论在慢病毒包装过程中的转染效率、细胞毒性及包装后病毒的感染效率方面显示出较好的效果。

3.通过编码传统四因子(oct4、sox2、klf4和c-myc)基因的重组慢病毒感染豚鼠胎儿成纤维细胞,使之成功重编程为豚鼠iPS细胞,并比较了3种小分子物质(维生素C、丙戊酸钠、丁酸钠)对细胞重编程的促进作用,最终发现添加维生素C和丙戊酸钠的培养基对重编程效率有着明显提升。

参考文献

[1]Nuclear Reprogramming of Somatic Cells After Fusion with Human Embryonic Stem Cells.Chad A.Cowan,Jocelyn Atienza,Douglas A.Melton,Kevin Egg.Science.2005

[2]Generation of mouse induced pluripotent stem cells without viral vectors.Okita K,Nakagawa M,Hyenjong H,Ichisaka T,Yamanaka S.Science.2008

[3]Histone code modifications on pluripotential nuclei of reprogrammed somatic cells.Kimura Hironobu,Tada Masako,Nakatsuji Norio,Tada Takashi.Molecular and Cellular Probes.2004

[4]Real-time PCR for single-cell genotyping in sickle cell and thalassemia syndromes as a rapid,accurate,reliable,and widely applicable protocol for preimplantation genetic diagnosis.C Vrettou,J Traeger-Synodinos,M Tzetis,G Palmer,C Sofocleous,E Kanavakis.Human Mutation.2004

[5]何承文.豚鼠诱导性多能干细胞样细胞的建立[D].宁夏大学,2015.