小鼠子宫颈上皮细胞试剂盒的应用

背景^[1-4]

小鼠子宫颈上皮细胞试剂盒适用于分离培养小鼠子宫颈上皮细胞。 小鼠子宫颈上皮细胞试剂盒提供了的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外,小鼠子宫颈上皮细胞试剂盒还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的子宫颈上皮原代细胞中成纤维细胞的含量。

小鼠子宫颈上皮细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的子宫颈上皮细胞。本试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠子宫颈上皮细胞组织解离液（2）小鼠子宫颈上皮细胞组织处理缓冲液（3）FibrOutTM小鼠子宫颈上皮细胞成纤维抑制剂（4）小鼠子宫颈上皮组织洗液（5）小鼠子宫颈上皮细胞生长因子及血清（6）小鼠子宫颈上皮细胞基础培养基（7）小鼠子宫颈上皮组织预备液8）小鼠子宫颈上皮细胞培养试剂盒使用说明书。

子宫颈位于子宫下部，近似圆锥体，长2.5～3cm，上端与子宫体相连，下端深入阴道。通俗地说，顾名思义，就是子宫颈部的意思，它连接阴道与子宫，具体位置就是阴道再往里面一点，其中，人子宫颈上皮细胞传5代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。小鼠子宫颈上皮细胞分离自子宫颈组织；子宫颈为子宫的最下部最细部，伸入阴道，呈圆柱状的部分是子宫颈。

子宫颈又可分为上、下两部，下部突入阴道称子宫颈阴道部，上部则称子宫颈阴道上部。子宫颈的内腔呈梭形，叫子宫颈管，其上口叫子宫颈管内口，与子宫体腔相通;下口叫子宫颈管外口，开口于阴道。

宫颈管内含有大量分泌腺。这些分泌腺在月经周期的各个阶段，分泌不同的粘液，排卵前夕和排卵期，宫颈分泌物稀薄;在其他时期，分泌物常常粘稠，粘稠的分泌物常常形成粘液栓而起封闭宫颈管外口的自洁作用。排卵期子宫颈粘液稀薄有利于精子通过和成活。体外培养的小鼠子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

应用^[5][6]

小鼠子宫颈上皮细胞试剂盒可用于饥饿对小鼠子宫颈上皮细胞中脂滴脂解和噬脂影响研究

脂滴(LDs)是来自内质网的特殊的、复杂的、多功能的细胞器,几乎存在于所有类型的细胞中。随着现代科技的发展,人们对LDs的生化结构、蛋白组学、生理功能、代谢调节和与之相关的疾病有了越来越深入的了解。细胞中有两种分解LDs的途径:一是通过中性脂酶,如甘油三酯脂肪酶(ATGL)和激素敏感酯酶(HSL),来水解LDs中的甘油三酯(TG)和胆固醇酯(CE)等其他脂质;另一方面可以通过自噬来吞噬LDs,然后经自噬溶酶体内的溶解酶来降解其中的脂质。LDs的代谢异常和功能失调与肥胖症、脂肪肝、动脉粥硬化、Ⅱ型糖尿病、炎症和癌症等多种疾病存在着密切关系。子宫颈是连接着子宫体和阴道的重要通道。妊娠期间子宫颈的关闭保证了子宫内胎儿的正常发育。而分娩时子宫颈口的开张为足月胎儿的产出提供了保障。

首先,采集小鼠子宫颈腔上皮层并进行消化和分离,在DMEM/F12培养液中进行原代培养,利用免疫荧光的方法检测角蛋白的阳性率以证实上皮细胞的纯度,结果显示培养的MCECs纯度>98%,符合实验要求。随后,用Hank’s平衡盐溶液(HBSS)替换DMEM/F12培养液来诱导饥饿,分别对MCECs进行饥饿处理0h、6h、12h和24h。利用荧光追踪法来检测细胞中LDs代谢的变化以及脂肪酸(FAs)在LDs和线粒体之间的转运状态。在饥饿处理前用Bodipy558/568(Red C12)标记FAs,然后开始对细胞进行饥饿处理,处理结束后分别用Bodipy493/503标记LDs和用MitoTracker Green标记线粒体(Mito),在共聚焦显微镜下观察FAs和LDs、FAs和Mito的位置关系。结果表明随着饥饿时间的延长,胞浆中的FAs含量逐渐增多,FA进入到线粒体中。

参考文献

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[3]Biology and pathobiology of lipid droplets and their potential role in the protection of the organ of Corti[J].Raul A.Urrutia,Federico Kalinec.Hearing Research.2015

[4]Seipin oligomers can interact directly with AGPAT2 and lipin 1,physically scaffolding critical regulators of adipogenesis[J].Md.Mesbah Uddin Talukder,M.F.Michelle Sim,Stephen O’Rahilly,J.Michael Edwardson,Justin J.Rochford.Molecular Metabolism.2015(3)

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[6]张康.饥饿对小鼠子宫颈上皮细胞中脂滴脂解和噬脂的影响[D].山东农业大学,2019.