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去脂胎牛血清的应用

发布日期:2019/9/6 10:51:25

背景[1-5]

去脂胎牛血清是将胎牛血清进行去脂处理的去脂血清。血清是血浆除去纤维蛋白原后的胶状液体。即血液凝固后1~2小时,血凝块发生回缩后释出淡黄色的液体。在人体总蛋白的含量为60~80g/L。其中主要是白蛋白和球蛋白。血清不会凝固,具有免疫、维持酸碱平衡和维持渗透压的功能。血清蛋白质可储备,以供给机体蛋白质不足时应用,含抗体的血清可作预防或治疗疾病之用。胎牛血清是妊娠后期未出生的剖腹取胎牛的血清。

胎牛血清营养成分完全而丰富,代谢产物极少,微生物感染的可能性最小,品质最高,是组织细胞培养和病毒增殖培养的重要营养来源。胎牛血清是常见的实验室培养基营养液,在大部分试验中是不需要对胎牛血清中的脂肪酸进行去除的,但是,在进行某些特殊细胞培养的时候为了保证实验的准确性和我们要读胎牛血清中的某些成分进行去除,常见的脂肪酸去除,一般用以下方法。

1.溶解。取适量的胎牛血清白蛋白提取物,溶解于10倍的蒸馏水中,溶解温度在23~27℃。用浓度为0.2N的HCl,调节PH至3~3.5。

2.解析。充分溶解后的溶液胎牛血清白蛋白移至冰水混合物中进行冰水浴,同时持续搅拌,维持30min。

3.吸附。加入5%的活性炭,混匀,混悬液将混悬液移至冰水混合物中进行冰水浴,同时持续搅拌,维持1小时。过滤,滤渣回收后再利用。

4.浓缩。滤液用0.2N的NaOH调节PH值至7.0,然后用20000分子量以下的超滤器进行超滤浓缩。

5.冻干。将浓缩液按冻干曲线冻干,即将超滤后的浓缩液迅速冷冻至-40℃,持续1小时左右,升到-25℃,持续10~20小时,再缓慢升温至0℃,维持1~4小时,升温至保存温度20℃,分装为成品。

功能

去脂胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。

1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

应用[6][7]

去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’与腺样囊性癌肺转移相关性研究:

蛋白激酶是酶类这个家族中最庞大的一员,被用来完成蛋白磷酸化作用的催化,这是控制细胞生命活动中最通常的机制。其中最具有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2。蛋白激酶CK2(protein kinase CK2,PKCK2),过去曾经被称为酪蛋白激酶-2或Ⅱ(cascin kinase2 orⅡ)。它是由两个催化亚基(aa’)和两个调节亚基(ββ)构成的不均一四聚体。

蛋白激酶CK2是由两个分别为42—44KDa和38KDa的aa’ββ型异四聚体结构。该结构很稳定,在体外只有在变性的条件下才能被解离。除了细胞基质,一些病毒蛋白也被CK2所磷酸化。蛋白激酶CK2在转录、信号、增殖,并且在导致肿瘤发生的各细胞步骤中发挥作用。

参考文献

[1]Minimal CK2 activity required for yeast growth[J].German H.Hermosilla,Julio C.Tapia,Jorge E.Allende.Molecular and Cellular Biochemistry.2005(1)

[2]Selectivity of 4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,an ATP site-directed inhibitor of protein kinase CK2(‘casein kinase-2’)[J].Stefania Sarno,Helen Reddy,Flavio Meggio,Maria Ruzzene,Stephen P.Davies,Arianna Donella-Deana,David Shugar,Lorenzo A.Pinna.FEBS Letters.2001(1)

[3]Subcellular localization of protein kinase CK2[J].Michael Faust,Mathias Montenarh.Cell and Tissue Research.2000(3)

[4]Protein kinase CK2 interacts with a multi-protein binding domain of p53[J].Molecular and Cellular Biochemistry.1999(1)

[5]Protein kinase CK2 and its role in cellular proliferation,development and pathology[J].BarbaraGuerra,Olaf‐GeorgIssinger.ELECTROPHORESIS.1999(2)

[6]Protein kinases and phosphatases:The Yin and Yang of protein phosphorylation and signaling[J].Tony Hunter.Cell.1995(2)

[7]佟爽.蛋白激酶CK_2-α'与腺样囊性癌肺转移相关性研究[D].中国医科大学,2009.