非冻型尿液DNA保存液

背景^[1-6]

非冻型尿液DNA保存液在室温条件下长期保存用于DNA提取的尿液样品保存液。它能够、长期保证DNA分子的完整性。

使用方法：

1.估计完全浸没样品所需要本产品的体积（1g组织需10mL）。

2.标记收集管并加入估计所需量的本产品。

3.以zui快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。

注:鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。

4.将组织碎块完全浸没于收集管的本产品中。

5.将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超过该温度下的zui长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在4℃放置过夜后再转移到zui后的温度。注：将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液。常见存放温度与其zui长存放时间关系为如下：

6.从存放处取出样品(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。

7.立即开始RNA提取或进行其他处理(如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。注:样品可以反复冻融二十次而其RNA质量不会受到影响。

产品特点：

1.操作简单,将组织剪薄浸没在RNAWAIT中即可使其RNA不被降解。

2.替代液氮,使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。

完整,因RNAwait能迅速抑制组织中RNA酶的活性,故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。

4.方便运输,处理过的样品能在25℃保存一周,使样品邮寄和运输变得容易和便宜,有利学术合作和交流。

5.反复冻融,经RNAwait处理的样品可反复冻融20次,其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA的质量。

6.结果准确,RNAwait进入细胞十分快速,基因表达在发生应急改变前就得以锁定,故RNA分析更能反映取样时的真况。

7.可比性强,RNAwait能减少大规模样品处理中的误差,增加各次实验数据间的可比性,对大规模基因表达谱的分析尤其有用。

8.兼容性广,处理过的样品可以使用TRIzol等试剂提取其RNA,样品还可直接用于组织切片,免疫学和流式细胞分析而不影响RNA的质量。

应用^[7][8]

非冻型尿液DNA保存液可用于尿液循环DNA检测中的保存运输：

循环DNA（circulating DNA）是存在于血清、血浆、唾液、尿液、脑脊液、前列腺液等体液中游离于细胞外的DNA。由于循环DNA在肿瘤、心肌梗死以及胎儿产前诊断中有重要的诊断价值，对其检测亦有“液体活检”之称。但是，循环DNA本身是自然降解的，并且其检测是一个多步骤的过程，从标本采集直到检测分析，其中的每一步都可能对检测结果产生重要的影响。

在本课题中，我们通过对分别位于16条常染色体和性染色体上共20个STR位点的分析，研究了不同温度条件下DNA在血清、尿液以及唾液中降解为77~446bp的小片段的半衰期情况，并且初步探讨了尿液对DNA的降解机制，从而，对体液标本采集后到提取前的放置时间、条件以及扩增子大小对检测结果的影响进行了初步的讨论。

方法：于体液中分别加入“裸DNA”和DNA-蛋白质复合物，在室温和37°C条件下孵育一定时间，应用全自动核酸提取仪，采用磁珠法对降解的系列体液标本统一进行DNA提取，同时，采用法医学实验室亲子鉴定技术对所提取DNA的20个短串联重复序列（STR）位点进行扩增分析，探讨了不同体液中高分子量基因组DNA降解为77~446bp的小分子片段的半衰期情况。同时，我们通过在尿液中加入EDTA、将尿液高温高压处理以及配制与尿液中尿素浓度相当的尿素溶液的方法，研究尿液中的酶类、耐高温成分以及尿素对DNA降解的影响。

参考文献

[1]Noninvasive measurement of smoking-associated N 3-ethyladenine and N 7-ethylguanine in human salivary DNA by stable isotope dilution nanoflow liquid chromatography–nanospray ionization tandem mass spectrometry[J].Hauh-Jyun Candy Chen,Chao-Ray Lin.Toxicology Letters.2014(1)

[2]Detection and characterization of invasive circulating tumor cells derived from men with metastatic castration‐resistant prostate cancer[J].Terence W.Friedlander,Vy T.Ngo,Huan Dong,Gayatri Premasekharan,Vivian Weinberg,Shaun Doty,Qiang Zhao,Elizabeth G.Gilbert,Charles J.Ryan,Wen‐Tien Chen,Pamela L.Paris.Int.J.Cancer.2014(10)

[3]Circulating Melanoma Cells in the Diagnosis and Monitoring of Melanoma:An Appraisal of Clinical Potential[J].Brigid S.Mumford,Gavin P.Robertson.Molecular Diagnosis&Therapy.2014(2)

[4]Circulating cf-DNA:A promising,noninvasive tool for assessment of early cardio-metabolic risk[J].Hui Song,Yongshan Nan,Xian Wu Cheng.Atherosclerosis.2014(1)

[5]Circulating cell-free DNA is associated with cardiometabolic risk factors:The Health 2000 Survey[J].Juulia Jylhv,Terho Lehtimki,Antti Jula,Leena Moilanen,Y.Antero Kesniemi,Markku S.Nieminen,Mika Khnen,Mikko Hurme.Atherosclerosis.2014(1)

[6]Incidence of congenital cytomegalovirus infection in Ireland:Implications for screening and diagnosis[J].Allison Waters,Karen Jennings,Emma Fitzpatrick,Suzie Coughlan,Eleanor J.Molloy,Cillian F.De Gascun,William W.Hall,Susan J.Knowles.Journal of Clinical Virology.2014(3)

[7]Diagnostic relevance of plasma DNA and DNA integrity for breast cancer[J].Oliver J.St?tzer,Julia Lehner,Debora Fersching-Gierlich,Dorothea Nagel,Stefan Holdenrieder.Tumor Biology.2014(2)

[8]王瑶.基于STR自动检测系统对DNA在血清、尿液和唾液中降解动力学的测定[D].大连医科大学,2014.