非冻型拭子DNA保存液

背景^[1-6]

非冻型拭子DNA保存液是一种常用的的生物样品取材方法，可以用于PCR等分子生物学分析。拭子取材的主要特点是快捷和非介入性（不会对对象造成伤害），尤其适用于大规模筛查取样和特殊群体（如儿童）和组织（如口腔）的取样。将拭子涂抹面颊的口腔内表面约十次,放入加有0.5 mL拭子保存液的1.5mL塑料离心管中,剪去专用拭子柄部,留药棉头于离心管中,盖上离心管后即可长期保存。

拭子是一种常用的的生物样品取材方法，可以用于PCR等分子生物学分析。拭子取材的主要特点是快捷和非介入性(不会对对象造成伤害)，尤其适用于大规模筛查取样和特殊群体（如儿童）和组织（如口腔）的取样。但是，对于野外采集的拭子样品和跨区域采集的拭子样品，如何保存并运输到统一处理中心一直是一个非常棘手的问题。

非冻型拭子DNA保存液具有下列特点：

1.常温保存时间长达半年，方便了拭子样品的野外采集和长途运输。

2.适用于各种拭子样品，包括口腔拭子、鼻腔拭子、阴道拭子等。

3.跟各种纤维棉拭子兼容。但使用本公司专用拭子效果更佳（因为所有优化都是在此专用拭子的基础上完成的，80802B包装含200只专用拭子）。

4.保存的拭子可以用柱式拭子DNAOUT（CAT#：80801）提取其DNA。

5.一个样品可以用一个微型离心管保存，程度地避免了样品间的交叉污染。

6.试剂本身安全环保，无毒。

应用^[7][8]

非冻型拭子DNA保存液可用于DNA样本快速采集及保存：

通过采集鼻咽拭子的方法,检测鼻咽癌高危人群中鼻咽部EBV-DNA载量,并评价这一指标是否能提高随访方法的特异度,减少需要反复随访人群的数量。材料与方法：广西苍梧县作为国家癌症早诊早治示范基地项目点,在2006年1月至2013年6月实施了鼻咽癌早诊早治筛查项目,从苍梧县随机抽取3个镇(石桥、沙头、梨埠镇),30-59岁当地居民纳入筛查对象,筛查对象经过免疫酶法检测血清EB病毒抗体、临床检查(头、颈部、鼻咽部检查)初次筛查后,将EB病毒抗体阳性者定为鼻咽癌高危人群并纳入高危人群队列进行随访。

在进行高危人群随访复查时,除采血进行免疫酶法检测血清VCA/IgA抗体滴度及临床检查外,同时收集到部分鼻咽癌高危人群鼻咽拭子样本。本研究通过提取鼻咽拭子样本中的DNA,采用实时荧光定量PCR方法(q-PCR)检测EB病毒DNA载量水平,分析鼻咽癌高危人群中血清VCA/IgA抗体滴度及鼻咽部EB病毒DNA载量分布情况,然后分析鼻咽拭子中EB病毒DNA载量与血清VCA/IgA抗体水平的关系,对鼻咽癌病例与高危人群的VCA/IgA与EBV-DNA载量水平进行比较。

最后,比较不同截断值(cut-off value)下VCA/IgA与EBV-DNA载量的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值,制作受试工作者特征曲线(ROC曲线),通过计算曲线下面积(Area under the curve,AUC)评估和对比两个检测指标的诊断效能。在鼻咽癌的高发地区,几乎100%的低分化型鼻咽癌患者携带有EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)。

目前,EBV相关抗体血清学检测己广泛应用于鼻咽癌的大规模人群筛查。对血清学筛查出抗体阳性的高危人群需要进行定期随访,随访的方法仍是以检测血清中EBV抗体及鼻咽镜检查为主,但此时检查方法的特异度已大幅降低,这些高危人群经过反复的检查,血清抗体一直处于阳性状态却无肿瘤的发生,即绝大多数的血清EBV抗体阳性的人群在随访过程中经受了不必要的抗体检测及鼻咽镜检查。因此寻找新的生物学标志物及方法来提高筛查诊断效率对鼻咽癌的筛查有较大的临床意义。

参考文献

[1]Evaluation of plasma Epstein‐Barr virus DNA load to distinguish nasopharyngeal carcinoma patients from healthy high‐risk populations in Southern China[J].Ming‐Fang Ji,Qi‐Hong Huang,Xia Yu,Zhiwei Liu,Xinghua Li,Li‐Fang Zhang,Panpan Wang,Shang‐Hang Xie,Hui‐Lan Rao,Fang Fang,Xiang Guo,Qing Liu,Ming‐Huang Hong,Weimin Ye,Yi‐Xin Zeng,Su‐Mei Cao.Cancer.2014(9)

[2]Early detection of nasopharyngeal carcinoma by plasma Epstein‐Barr virus DNA analysis in a surveillance program[J].K.C.Allen Chan,Emily C.W.Hung,John K.S.Woo,Paul K.S.Chan,Sing‐Fai Leung,Franco P.T.Lai,Anita S.M.Cheng,Sze Wan Yeung,Yin Wah Chan,Teresa K.C.Tsui,Jeffrey S.S.Kwok,Ann D.King,Anthony T.C.Chan,Andrew C.van Hasselt,Y.M.Dennis Lo.Cancer.2013(10)

[3]Current understanding and management of nasopharyngeal carcinoma[J].Tomokazu Yoshizaki,Makoto Ito,Shigekyuki Murono,Naohiro Wakisaka,Satoru Kondo,Kazuhira Endo.Auris Nasus Larynx.2011(2)

[4]Plasma Epstein‐Barr virus DNA screening followed by 18F‐fluoro‐2‐deoxy‐D‐glucose positron emission tomography in detecting posttreatment failures of nasopharyngeal carcinoma[J].Wen‐YiWang,Chih‐WenTwu,Wan‐YuLin,Rong‐SanJiang,Kai‐LiLiang,Kuan‐WenChen,Ching‐TeWu,Yi‐TingShih,Jin‐ChingLin.Cancer.2011(19)

[5]Expression of Epstein‐Barr virus‐encoded LMP1 and hTERT extends the life span and immortalizes primary cultures of nasopharyngeal epithelial cells[J].Yim‐LingYip,Chi‐ManTsang,WenDeng,Pak‐YanCheung,YueshengJin,Annie Lai‐ManCheung,Maria LiLung,Sai‐WahTsao.J.Med.Virol..2010(10)

[6]Different Clinical Significance of Pre-and Post-treatment Plasma Epstein–Barr Virus DNA Load in Nasopharyngeal Carcinoma Treated with Radiotherapy[J].Xue Hou,Chong Zhao,Ying Guo,Fei Han,Li-Xia Lu,Shao-Xiong Wu,Su Li,Pei-Yu Huang,He Huang,Li Zhang.Clinical Oncology.2010(2)

[7]Global Cancer Statistics,2002[J].D.MaxParkin,FreddieBray,J.Ferlay,PaolaPisani.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2009(2)

[8]陈裕锋.鼻咽癌高危人群中鼻咽拭子EB病毒DNA定量检测及其在鼻咽癌筛查中的应用[D].广西医科大学,2015.