腺苷脱氨酶的主要应用

背景及概述^[1]

腺苷脱氨酶(ADA)，腺嘌呤核苷酸氨基水解酶；酶编号：EC3·5·4·4；分子量：35000，100000；人体组织中腺苷脱氨酶有3种，二种单体酶，另一种为酶-糖蛋白结合体。有多种方法可测腺苷脱氨酶活性，最简单的测定方法是利用底物腺苷和产物次黄苷在紫外265nm处吸光度有显著差异的性质。另一大类方法是测定产物氨，目前应用最多。在患急性淋巴细胞白血病、急性病毒性肝炎、慢性活动性肝炎及原发性肝癌时，血清中腺苷脱氨酶含量升高。患先天性贫血症时该酶也升高。结核性胸、腹水中腺苷脱氨酶活力明显高于其他病因，故可用于结核性胸、腹水的诊断，结核性与癌性胸水的鉴别诊断。腺苷脱氨酶同工酶检测，可提高其对相关疾病诊断的特异性和灵敏度。

活性测定^[2]

生物组织中的ADA含量微乎其微，直接测定ADA含量非常困难。因此，临床上普遍通过测定ADA所催化的酶促反应速率(v)测定酶活性。ADA可通过不可逆的脱氨作用分别催化腺苷和脱氧腺苷形成肌苷和脱氧肌苷。由于ADA对腺苷的亲和性高，因此，腺苷常为ADA酶促反应的底物，可根据腺苷的消耗速率、产物肌苷或氨的生成率评估ADA的活性。但生物样品成分复杂，在分析其ADA活性时，腺苷与肌苷还可能参与其他代途径，如嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP)也广泛地存在于人体组织中，它可快速将肌苷转化成次黄嘌呤，若单独通过肌苷的生成率评估ADA活性，会产生较大的偏差。Carlucci等以肌苷与次黄嘌呤的生成量来评估正常人与SCID患者红细胞中的ADA活性。而Paul等仅通过肌苷的生成分析T淋巴瘤细胞中ADA的活性，由于PNP也存在于T细胞中，肌苷是否被分解需要验证。因此，对于临床样品中ADA的活性分析，待测底物与产物是否进一步参与其他代谢需首先被考虑。HPLC分析尿中腺苷脱氨酶活性过程如下：

应用^[3]

1. ADA在肝脏疾病诊疗中的临床价值

血清中ADA主要来源于肝脏，肝内ADA主要存在于细胞质中，肝细胞受损时，ADA释放进入血液循环，引起外周血中ADA升高，故ADA活性是反映肝细胞活性的敏感指标，可作为肝功能检查的常规项目之一，与ALT、AST、ALP、GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝病的酶学改变。肝炎是我国常见病之一，作为一种高发性传播疾病，肝炎已经严重威胁我们的身体健康和日常生活，肝炎种类很多，根据美国临床生物化学学会(theAmericansocietyforclinicalbiochemistryNACB)的标准，把肝炎分为急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝癌。ADA既能反映急性肝损伤程度与恢复过程，又有助于探测急性肝炎的残留病变和进展情况。在慢性肝损伤时，血清ADA明显增高，其阳性率达85.6%－91.2%，因此，ADA活性检测可作为慢性肝病的筛选指标之一；慢性活动性肝炎患者的血清ADA活性明显高于慢性迁延性肝炎，故可用于两者的鉴别诊断。肝硬化时血清ADA活性显著升高，失代偿期肝硬化ADA活性高于代偿期肝硬化；在肝硬化时，转氨酶阳性率较低，增高幅度也不明显，而ADA活性的阳性率可达90%左右，增高程度较明显，因此，ADA可作为肝硬化病情监测的较好的酶学指标，且随着Child－Pugh分级，各级之间比较，差异有统计学意义。还有报道认为，经治疗后，ADA水平下降不明显者预后差，若ADA持续高水平，则病情有可能进一步恶化。因此，检测ADA水平对判断肝硬化预后有一定临床意义。有报道认为，ADA活性差异与肝纤维化程度呈高度正相关，随着肝纤维化程度增加，ADA活性增加，即肝硬化＞慢性活动性肝炎＞慢性迁延性肝炎。总之，ADA对肝脏疾病的诊断、鉴别诊断和判断肝病演变方向以及预后都具有一定的临床价值，对评估肝功能状况可以起到辅助作用。

2. ADA在结核病诊断中的临床价值

血清、胸腹水、脑脊液、支气管肺泡灌洗液中的ADA活性在结核性患者中都可升高，胸腔积液ADA用于结核性胸膜炎的诊断于1978年为Piras等首先报道，其相关报道陆续出现。黄春合等检测60例癌性胸水和90例结核性胸水，研究中，结核性胸腔积液中ADA的值明显高于癌性胸腔积液，对结核诊断的敏感性为81.1%，特异性为91.6%，国内外有许多文献报道了ADA对结核性胸膜炎有较高的临床诊断意义，且胸腔积液ADA的敏感性显著优于在胸腔积液中查找结核杆菌、结核菌素试验和查结核抗体，具有很高的阳性预测值，对诊断结核性胸膜炎具有高敏感性及高特异性，可作为诊断的一项客观指标］。张红梅等研究表明，结核性脑膜炎患者ADA明显升高，其阳性率94.3%(33/35)，化脓性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者ADA基本正常。因此脑脊液ADA活性可作为结核性脑膜炎早期鉴别的快速简便的诊断指标。此外，对肿瘤、结核产生的胸腹水、联合检测癌胚抗原(CEA)和ADA，可提高恶性胸腔积液鉴别诊断的水平。

3. ADA在糖尿病诊疗中的临床价值

糖尿病(DM)是一组由于体内胰岛素绝对或相对不足以致高血糖为特征的内分泌代谢疾病，目前发现与遗传、免疫、环境等因素密切相关，糖尿病患者机体免疫功能与糖尿病诊断、病情演变等之间的联系已引起许多学者的重视。ADA是T淋巴细胞分化成熟不可缺少的成分，ADA缺乏可导致T细胞生长发育障碍，影响机体免疫功能，因此ADA被认为是细胞免疫的指标。Kurtul研究发现DM患者尤其是2型糖尿病患者血清ADA明显升高。杨海青等也发现DM患者血清ADA升高明显，而糖尿病肾病患者血清ADA的活性升高更明显，且与尿微量白蛋呈明显的正相关，说明血清ADA的活性愈高，DM患者的肾损害的可能性愈大。黄春秀等的研究发现DM1和DM2组的WBC和ADA水平均升高，但DM2组升高的更多，与对照组比较有统计学意义(P＜0.05)，同时ADA与CD3、CD4和CD4/CD8呈正相关，提示2型糖尿病患者体内持续高活性的ADA使T－淋巴细胞不断处于旺盛的增殖状态，可能以CD4+T细胞增殖为主，使CD4细胞产生细胞因子(如IL－2、IFN－γ)增加，从而加快糖尿病肾病的发生发展。而且2型糖尿病患者血清ADA的动态观察对DM2早期肾损伤诊断也有重要参考价值。

4. ADA在恶性血液病诊疗中的临床价值

腺苷脱氨酶是嘌呤核苷代谢的重要酶，近年研究发现ADA与恶性血液病，尤其是淋巴系统恶性肿瘤存在着密切相关性。对95例恶性血液病患者进行了血浆ADA的动态测定，发现淋巴细胞白血病(ALL、CLL等)与MM、ML等血浆中ADA活性明显高于健康对照组；以急慢性淋巴细胞白血病最为显著，而髓系肿瘤中除AML外，APL、MDS及MPD患者血浆ADA水平无明显升高；AL、MM、ML治疗前后血浆ADA活性差异明显，治疗后ADA活性较治疗前明显降低；该研究还发现部分恶性血液病ADA活性的高低与外周血肿瘤细胞的数量密切相关，推测外周肿瘤负荷与ADA活性也呈现一定相关性；这些结果充分表明，血清ADA活性检测有助于鉴别诊断良性、恶性血液病及辅助判断病情的变化。

5. ADA在自身免疫性疾病诊疗中的临床价值

系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是一种以免疫功能紊乱为特征的自身免疫性疾病，近年来研究发现T淋巴细胞的激活程度反映了SLE的活动度。研究表明SLE患者血清ADA活性显著高于正常对照组(P＜0.01)；Taysi等研究认为其升高的机理主要是SLE患者血清ADA除了来自活化的T淋巴细胞外，还主要来自于单核巨噬细胞系统活化产生的ADA同功酶的增加所致。周玉贵等的研究结果还显示SLE患者血清ADA活性在SLE病情轻重程度有着显著的差异，且血清ADA活性升高与SLEDAI积分存在高度相关性，表明血清ADA的变化与病情的严重程度有密切联系，对了解病情的严重程度有一定的临床价值。成人Still＇s病(adult－onsetstilldisease，AOSD)是一种系统性自身免疫性疾病，其病因、临床表现及预后均存在较高的异质性。该病诊断比较困难，目前尚无特异性方法，主要依据排除法，故误诊率高。研究结果显示与对照组(系统性红斑狼疮患者组和健康对照组)相比ADA、AOSD组血清ADA活性增高，且血清ADA与LDH呈现明显的正相关，而与WBC无显著相关性。证明ADA可能是AOSD潜在的诊断标志物。另外，有研究揭示ADA的缺陷会导致其他严重的免疫缺陷和免疫功能失调。

6. ADA的其他临床价值

伤寒与副伤寒杆菌主要侵犯回肠末端和集合淋巴小结并在网状内皮细胞内繁殖，致使这些细胞变性坏死，组织中ADA释放入血，从而引起血清ADA活性增高。研究表明ADA在伤寒与副伤寒中明显升高，与健康体检者及其他发热患者比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。因此ADA测定可作为伤寒和副伤寒早期诊断和与其他发热患者鉴别诊断的辅助检查指标。

主要参考资料

[1] 内科学·卷

[2] 腺苷脱氨酶活性分析方法研究进展

[3] 腺苷脱氨酶的临床价值及其应用进展