网站主页 > T4 RNA 连接酶1 > 新闻专题 > T4RNALigase1的制备方法

T4RNALigase1的制备方法

发布日期:2019/4/29 9:53:20

背景及概述[1]

连接酶是一种能催化两个不同或相同分子的两端相连接的酶,此反应与ATP分解反应相偶联。T4RNALigase(T4RNA连接酶)是以不依赖于模板的形式催化供体核酸的5'-磷酰基末端和受体核酸的3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶活性依赖ATP,可作用于广泛的底物,包括RNA,DNA,寡核糖核酸、寡脱氧核糖核酸和很多其它核酸衍生物。T4RNALigase主要用于RNA5´末端加寡聚核酸用于映射和测序5´端,或用于cDNA合成(RACE);用于3'-末端RNA标记;用于连接RNA和DNA;用于修饰突变RNA。

制备方法[1]

T4RNALigase1可用于制备腺苷酰化接头,腺苷酰化接头能够被截短型的T4RNA连接酶2特异性识别,在没有ATP存在的条件下将腺苷酰化接头5’端有腺苷酰化修饰的磷酸与RNA的3’端的羟基连接,形成3,5-磷酸二酯键。

其制备方法包括:

(1)先合成一段寡核苷酸,寡核苷酸5’端磷酸化修饰,3’端进行氨基修饰、双脱氧胞嘧啶、磷酸修饰、荧光标记修饰、倒转碱基修饰或生物素标记修饰中的一种;

(2)将步骤(1)的寡核苷酸在非截短型的T4RNALigase1催化下与ATP反应,获得腺苷酰化接头。

本申请的制备方法,打破传统化学合成腺苷酰化接头的思维限制,先合成寡核苷酸,T4RNALigase1将ATP分解成AMP,AMP转移到磷酸上,形成腺苷酰化,由于3’端修饰,寡核苷酸保持在腺苷酰化中间态,从而制备出腺苷酰化接头。本申请的制备方法成本低、效率高,能满足使用需求,有效的降低了RNA高通量测序的成本。

参考资料

[1] CN201410391721.X一种制备腺苷酰化接头的方法及腺苷酰化接头