小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒是用于检测小鼠样本中亚甲基四氢叶酸还原酶抗体（MTHFR Ab）含量的实验工具。以下是对该试剂盒的详细介绍：

小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒

一、基本信息

产品名称：小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体(MTHFR Ab)ELISA试剂盒

用途：主要用于科研实验，检测小鼠血清、血浆、唾液、尿液、组织、细胞上清、裂解液等样本中的MTHFR Ab含量。

保存条件：一般建议存储于2-8℃的冷藏环境中，以确保试剂的稳定性和活性。

保质期：通常为6个月，具体以产品说明书为准。

规格：常见的有48T和96T两种规格，分别代表试剂盒可进行48次和96次检测。

二、小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒产品特点

高灵敏度与特异性：采用先进的ELISA技术，能够高灵敏度、特异性地检测小鼠样本中的MTHFR Ab。

操作简便：试剂盒通常包含完整的试剂组分和详细的操作说明书，用户只需按照说明书步骤操作即可完成实验。

稳定性好：试剂盒中的组分经过严格的质量控制，确保实验的稳定性和重复性。

三、供应商信息

市场上有多家供应商提供小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒，包括但不限于天津睿创生物科技有限公司、上海佰利莱生物科技有限公司、上海研玘生物技术有限公司和上海化邦生物科技有限公司等。这些供应商通常具有完善的生产、研发和销售体系，能够提供高质量的产品和专业的技术支持。

四、小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒可以用于17β-雌二醇致血栓形成风险的临床研究

对在人类辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)领域的冻融胚胎移植(frozenembryo transfer,FET)周期中行雌激素替代治疗(estrogen replacement therapy,ERT)方案时,不同人群、不同17β-雌二醇剂量、时间和用药方式等情况下的血清雌二醇(estrogen,E2)水平、抗凝血酶Ⅲ(antithrombinⅢ,ATⅢ)和凝血因子Ⅹ(coagulation factorⅩ,FⅩ)水平进行分析,初步探讨雌激素致血栓形成的风险及其发生机制。

方法:选取2015年11月至2016年8月于福州总医院生殖中心行FET的患者,共195例,术前体检排除高血压、糖尿病等严重内科疾病,年龄22-40岁,子宫内膜准备方案有自然周期、微刺激和激素替代3种,行自然周期或微刺激周期患者30例为对照组,行ERT患者165例为研究组。两组全部使用小鼠亚甲基四氢叶酸还原酶抗体ELISA试剂盒检测亚甲基四氢叶酸还原酶、同型半胱氨酸、抗心磷脂抗体等血栓形成的基础危险因素,其中表现为亚甲基四氢叶酸还原酶CC型、同型半胱氨酸正常水平及抗心磷脂抗体阴性分为对照组、研究A组(血栓形成基础风险低),三项中一项或多项异常分为研究B组(血栓形成基础风险高)。对照组在HCG注射日(即LH峰日),于注射HCG前检测E2、ATⅢ、FX;研究组第1天、第13天于用17β-雌二醇前检测血清E2,ATⅢ,FⅩ,患者用药第12天之后医生根据内膜厚度决定是否继续服用或加阴道用雌激素,直至黄体酮转化日。

结果:1.血清E2平与用药时间研究组(研究A组与研究B组):雌激素用药12天、15天、17天E2水平均大于用药前(P<0.05);雌激素用药15天、17天E2氏水平大于用药12天(P<0.05);雌激素用药17天E2水平大于用药15天(P<0.05)。数据显示血清E2水平随着用药时间而增加。2.研究组各用药时间E2水平研究A组:雌激素用药12天E2水平小于对照组(LH峰日)(P<0.05),但用药15天、17天E2水平大于对照组(P<0.05)。研究B组:与研究A组不同的是,用药15天E2水平与对照组无统计学意义(P>0.05)。数据显示口服雌激素12天E2水平小于对照组(LH峰日);增加雌激素阴道用药后,雌激素水平波动范围较大。

参考文献

[1]Oral vs Transdermal Estrogen Therapy and Vascular Events:A Systematic Review and Meta-Analysis[J].Khaled Mohammed;;Abd Moain Abu Dabrh;;Khalid Benkhadra;;Alaa Al Nofal;;Barbara G.Carranza Leon;;Larry J.Prokop;;Victor M.Montori;;Stephanie S.Faubion;;Mohammad Hassan Murad.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolis,2015(11)

[2]Changes in haemostatic parameters during the menstrual cycle and subsequent use of drospirenone-containing oral contraceptives[J].S.N.Tchaikovski;;M.C.L.G.D.Thomassen;;S.D.Costa;;K.Bremme;;J.Rosing.Thrombosis Research,2014

[3]Hormone replacement therapy and venous thromboembolism[J].Andrew Eisenberger;;Carolyn Westhoff.Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,2014

[4]Hormones and venous thromboembolism among postmenopausal women[J].P.-Y.Scarabin.Climacteric,2014(S2)

[5]彭陈娟.17β-雌二醇致血栓形成风险的临床研究[D].福建中医药大学,2017.