兰瑞肽的合成

介绍

兰瑞肽（lanreotide）是一种已经上市的药物，主要用于治疗肢端肥大症以及对于手术和(或)放射疗法不应答的患者，或者不适合进行手术和(或)放射疗法治疗的患者。外观为白色冻干块状。

兰瑞肽

合成

现有合成的缺点

兰瑞肽含有一对二硫键，对于二硫键的合成，一般采用链上固相合成，即采用氧化剂碘直接在树脂上形成二硫键。或者将线性肽从树脂上裂解下来后，在液相中采用碘或双氧水形成二硫键。CN110330560A介绍了一种lanreotide的合成方法，其先采用固相方法合成兰瑞肽全保护肽，然后将全保护肽溶解于溶液中，采用碘氧化的方式形成二硫键，然后再脱除保护基团，获得lanreotide，产品存在0.4％以上的二聚体。

兰瑞肽的序列中有易被碘代的Tyr残基，所以采用碘在树脂上氧化和液相氧化存在Tyr氧化杂质的风险，同时，强氧化剂碘的使用使二聚体的可能性大大增加。采用双氧水氧化时，需将氧化液体系调至p H值为碱性，但此肽在碱性条件下溶解度差，在p H为7.2以上时，肽在溶液情况下析出，无法氧化。以上常规氧化方法不适于兰瑞肽的二硫键形成，二聚体杂质较多，纯度较低。

新合成方法

宓鹏程[1]提供一种兰瑞肽的制备方法，使得该方法获得的兰瑞肽收率和纯度较高、杂质少。具体步骤如下：

第一步：称取替代度为1 .0mmol/g的Rink  Amide  Resin树脂100g于固相反应柱中，加入DMF，氮气鼓泡溶胀60分钟；称取Fmoc‑Thr(t Bu)‑OH  39 .8克(100mmol)、HOBt16 .2克(120mmol)，用DMF溶解，0℃下加入20.3m L(120mmol)DIC,活化5分钟，加入反应柱。反应两小时后，加入70m L醋酸酐和60m L吡啶，混合封闭24小时，DCM洗涤三次，甲醇收缩后抽干树脂，得到Fmoc‑Thr(t Bu)‑Rink  Amide  Resin树脂，检测替代度为0.62mmol/g。

第二步：称取上一步制备的替代度为0 .50mmol/g的Fmoc‑Thr(t Bu)‑Rink  Amide‑MBHA Resin树脂100g于固相反应柱中，加入DMF，氮气鼓泡溶胀60分钟；然后用DBLK脱保护6min+8min，DMF洗涤6次。称取87.8g(150mmol)Fmoc‑Cys(Trt)‑OH和24.3g(180mmol)HOBT用DMF溶解，冰水浴下加入28.1m L(180mmol)DIPCDI活化3min后，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点(如树脂无色透明则终止反应；如树脂显色则延长反应1小时)。反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护6min+8min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。重复上述偶联操作，按照肽序依次偶联Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑D‑Trp(Boc)‑OH、Fmoc‑Tyr(t Bu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Nal‑OH，得到肽树脂178.9g。

第三步：将上一步得到的肽树脂178.9克加入到3L三口瓶中，加入预先配置好预冷至0摄氏度以下的TFA:EDT:苯甲硫醚：苯甲醚＝90：5：3：2(V:V)1.79L，室温反应2小时，过滤树脂，收集滤液。用少量TFA洗涤树脂，合并滤液。将滤液缓慢加入17.9L冰乙醚中沉淀，离心，冰乙醚洗涤5次，减压干燥得粗肽55.5克，重量收率101.6％。

第四步：称取上一步中Nal‑Cys‑Tyr‑D‑Trp‑Lys‑Val‑Cys‑Thr‑NH2线性粗肽55 .5g(50mmol)，用18.5L纯化水溶解，配置成3mg/ml的水溶液。量取12.1ml(150mmol)NCS加入反应液中，搅拌反应60min，HPLC检测无线性肽原料存在，得到Nal‑cyclo[Cys‑Tyr‑D‑Trp‑Lys‑Val‑Cys]‑Thr‑NH2溶液。直接用高效液相纯化制备。以反相十八烷基硅烷为固定相，纯化(纯化体系为：A相：0.1％TFA，B相：乙腈，梯度：B％＝21％‑41％(60min))，收集目的峰馏分，浓缩冻干，得纯品兰瑞肽33.9g，纯度大于99.5％，总收率61.9%。

参考文献

[1]宓鹏程,王亮,潘俊锋,等.一种兰瑞肽的制备方法[P].甘肃省:CN202110907954.0,2021-10-08.