核酸外切酶T的介绍

背景及概述^[1]

核酸外切酶是指水解酶类中几种亚类酶的总称(EC3.1.11.13.14.15.16)。它们催化单个核苷酸残基的水解，只水解DNA或RNA链的末端核苷酸。该酶在核酸的分解代谢、维持和修复中起重要作用，可用于多核苷酸的序列测定。核酸外切酶是一种要求有一个游离末端才能降解DNA或RNA的酶。5′-核酸外切酶需要有一个游离的5′端，从5′→3′的方向逐个降解核酸分子；3′-核酸外切酶则需要一个3′游离端，并按相反方向逐个降解核酸分子；而外切核酸酶Ⅲ(ExoⅢ)则是大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)的一个多功能酶，使用最多的酶活性是3′→5′-核酸外切酶的活性，可在dsDNA中造成一个ssDNA区，故可用于Sanger的DNA序列分析法中。核酸外切酶只能从一个游离末端开始水解DNA或RNA分子的一类核酸酶。

核酸外切酶T(ExoT)又称核糖核酸酶T(RNaseT)，沿3→5方向特异性作用于单链RNA或DNA的3突出末端。核酸外切酶T作用于3突出末端，产生RNA或DNA分子的平末端。核酸外切酶T具体有下列特点：1.特异地作用于单链DNA或RNA2.使DNA或RNA的3突出端变为平齐末端3.无核酸内切酶和外切酶污染。核酸外切酶T反应条件：1XBuffer4[50mM醋酸钾，20mMTris-Ac，10mM醋酸镁，1mMDTT(pH7.9@25℃)]。25℃温育。核酸外切酶T对RNA和DNA具有不同的活性。对于RNA，在标准反应条件下，通过凝胶电泳检测，1单位核酸外切酶T可以完全消化1.0pmol的rA20。

主要参考资料

[1] 微生物学词典

[2] 兽医大辞典