成人皮肤成纤维细胞的相关研究

背景及概述^[1-2]

成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见而且数量较多的一种细胞，位于胶原纤维近旁并依附于其上。此细胞的形态结构可随其功能状态的不同而改变。在功能活动旺盛时，成纤维细胞的胞体较大，呈扁平星形，有突起。胞核呈卵圆形，核染色质较少，着色浅，核仁明显。胞质较多，弱硷性，内含丰富的粗面内质网、核蛋白体、高尔基复合体以及微丝和微管等结构，表明此种细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白，形成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维和基质的作用。在相对静止或功能活动不活跃时的细胞，称为纤维细胞。这种细胞比成纤维细胞小，轮廓不甚清楚，多呈梭形。胞质少，弱嗜酸性，其中粗面内质网、高尔基复合体及其它细胞器均不发达。这表明纤维细胞是功能活动不活跃的细胞。但在一定条件下，如创伤修复，结缔组织再生时，纤维细胞可转化为功能活跃的成纤维细胞，积极参与合成和分泌蛋白质，形成纤维和基质。

用正常成人包皮组织建立成人皮肤成纤维细胞在体外长期传代培养达400余天。细胞形态为成纤维样并呈规则的放射状生长。细胞培养于含有15％小牛血清的Ⅰ号培养液中并以1：2比例传代培养。细胞系的群体倍增肘间为26小时，其生长曲线呈“S”形。该细胞系染色体众数为46，自发姐妹染色单体交换率(SCE)为0.144/每染色体，紫外线(UV)诱发SCE率为0.143/每染色体。该细胞系经UV诱发的非合成期DNA修复合成(UDS)水平也是正常的。上述结果表明，成人皮肤成纤维细胞是具有正常DNA损伤修复功能的人二倍体细胞系，可以用于许多研究中作为正常对照细胞。

相关研究^[3-4]

有研究将人血管内皮生长因子(hVEGF)基因导入原代离体成人皮肤成纤维细胞，验证转基因细胞分泌hVEGF情况，探讨成人自体细胞基因修饰后移植的可行性。采用酶消化法获取成纤维细胞，以杜氏改良培养基(DMEM)传代培养。以脂质体转染法将pcDNA3.1(+)/hVEGF121导入成纤维细胞，培养48h后取细胞作逆转录多聚酶链式反应(RTPCR)，上清行酶联免疫吸附反应(ELISA)检测、MTT测定和Mile’s实验。结果转基因细胞经RTPCR扩增出一条约444bp条带，ELISA显示转基因细胞培养上清VEGF浓度约(12.32±0.39)μg/L，MTT显示上清明显促内皮细胞增殖，Mile’s实验显示上清明显增加毛细血管通透性。因此质粒pcDNA3.1(+)/hVEGF121成功转染成人皮肤成纤维细胞，转基因细胞能表达分泌有生物活性的VEGF121蛋白。

此外，还有实验观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导成纤维细胞转分化的影响，探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。体外培养成人皮肤成纤维细胞，利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达的影响，利用Westernblot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果显示TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比，10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少(P<0.01)，抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMAmRNA水平显著下降(P<0.01)。因此PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人皮肤成纤维细胞的转分化的效应，具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。

主要参考资料

[1] 运动解剖学、运动医学大辞典

[2] 正常成人皮肤成纤维细胞系(NHF8)的建立及其生物学特性的研究

[3] 人血管内皮生长因子基因转染原代成人皮肤成纤维细胞研究

[4] PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用