YD-15 人舌鳞癌细胞系的应用

背景^[1-3]

YD-15人舌鳞癌细胞系是一种来源于人舌鳞状细胞癌的细胞系，属于上皮性肿瘤。该细胞系具有高增殖能力、易形成肿瘤球和转移等特点，被广泛应用于舌鳞状细胞癌相关研究。

YD-15人舌鳞癌细胞系的建立始于20世纪80年代，当时研究人员从一例舌鳞状细胞癌患者的肿瘤组织中分离出肿瘤细胞，并成功建立了该细胞系。目前，YD-15细胞系已经成为一种常用的舌鳞状细胞癌研究模型，被广泛应用于舌鳞状细胞癌的发生机制、肿瘤生物学特性、药物筛选和治疗等方面。

YD-15人舌鳞癌细胞系具有以下特点：

高增殖能力：YD-15细胞系具有较快的生长速度和较高的增殖能力，可以在体外持续传代。

易形成肿瘤球：YD-15细胞系在培养过程中容易形成肿瘤球，这是一种由单个肿瘤细胞或少数肿瘤细胞聚集形成的球状结构。肿瘤球的形成有助于维持肿瘤细胞的干细胞特性和生长信号通路的激活。

转移能力强：YD-15细胞系具有较强的转移能力，可以通过血液或淋巴系统转移到其他部位形成转移瘤。

多药耐药性：YD-15细胞系具有多药耐药性，即对多种化疗药物产生抗性。这使得该细胞系在药物筛选和治疗研究中具有一定的应用价值。

YD-15人舌鳞癌细胞系

YD-15人舌鳞癌细胞系培养操作

1)复苏YD-15人舌鳞癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)YD-15人舌鳞癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)YD-15人舌鳞癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

YD-15人舌鳞癌细胞系可以用于葫芦素B通过调控LncRNA H19的表达诱导舌鳞癌细胞凋亡

过探究葫芦素B对YD-15人舌鳞癌细胞系及CAL27细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响,明确葫芦素B对舌鳞癌细胞的抗肿瘤作用,并初步探索其诱导凋亡的作用机制。

方法:1.通过CCK8法检测使用不同浓度葫芦素B处理24 h对YD-15人舌鳞癌细胞系、CAL27增殖的影响。明确最佳处理浓度后,使用该浓度的葫芦素B分别处理SCC9、CAL27细胞24 h、48 h、72 h检测细胞增殖的情况。

2. 用葫芦素B处理SCC9细胞24 h后,Annexin V-FITC/PI法染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PI法染色后流式细胞仪检测细胞周期分布情况,划痕实验检测细胞迁移愈合情况。

3. 选取10例舌鳞癌患者新鲜组织标本,通过qPCR检测人舌鳞癌和癌旁组织LncRNA H19、miR675-5P的表达差异。

4. 通过qPCR检测葫芦素B处理SCC9细胞24 h后LncRNA H19、miR675-5P表达情况。

5. 利用细胞转染技术将si-H19转染进舌鳞癌SCC9细胞中,构建敲低LncRNA H19的舌鳞癌SCC9细胞系。

6. 在YD-15人舌鳞癌细胞系中敲低LncRNA H19,用Annexin V-FITC/PI法染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

7. 在分别敲低LncRNA H19及葫芦素B处理后,免疫印迹法检测YD-15人舌鳞癌细胞系凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。

实验结果:1.在SCC9、CAL27细胞中,用梯度浓度的葫芦素B处理后,两种细胞都受到了不同程度抑制,具有浓度依赖性。随着作用时间的增长,抑制作用增强,具有时间依赖性。

2. 经葫芦素B处理后SCC9细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡显著增加,在24h、48h后的细胞迁移率低于对照组。

3. 与癌旁组织相比,LncRNA H19与miR675-5P在人舌癌组织中表达增高。

4. 经葫芦素B处理后miR675-5P与LncRNA H19表达均下调。

5. 成功构建敲低lncRNA H19的舌鳞癌SCC9细胞。

6. 敲低LncRNA H19后SCC9细胞凋亡率升高。

7. 经葫芦素B处理后SCC9细胞内Bax表达升高,Bcl-2表达显著下调;敲低LncRNA H19后SCC9细胞出现Bax表达升高,Bcl-2表达显著下调。

结论:1.葫芦素B可抑制YD-15人舌鳞癌细胞系及CAL27增殖,诱导SCC9细胞凋亡,抑制迁移,将细胞周期阻滞于G2/M期。2.LncRNA H19、miR675-5p在人舌癌组织中过表达。3.葫芦素B通过下调LncRNA H19调控Bax及Bc L-2蛋白表达诱导SCC9细胞凋亡。

参考文献

[1]Apoptosis(programmed cell death)and its signals-A review.[J].Obeng E.Brazilian journal of biology=Revista brasleira de biologia,2021

[2]Long Noncoding RNAs at the Crossroads of Cell Cycle and Genome Integrity[J].Guiducci Giulia;Stojic Lovorka.Trends in Genetics,2021

[3]New Insights into CDK Regulators:Novel Opportunities for Cancer Therapy[J].Bury Marina;Le CalvéBenjamin;Ferbeyre Gerardo;Blank Volker;Lessard Frédéric.Trends in Cell Biology,2021

[4]Roles of the H19/microRNA‑675 axis in the proliferation and epithelial‑mesenchymal transition of human cutaneous squamous cell carcinoma cells[J].Zhang Wenqing;Zhou Kaili;Zhang Xue;Wu Chenglong;Deng Dan;Yao Zhirong.Oncology Reports,2021

[5]刘映坤.葫芦素B通过调控LncRNA H19的表达诱导舌鳞癌细胞凋亡[D].吉林大学,2022.