KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系的应用

背景^[1-3]

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系是一种人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系，由Karpas等人于1986年建立。该细胞系来源于一名60岁男性患者的淋巴结，最初被诊断为Burkitt淋巴瘤。然而，随后的研究表明，该细胞系可能代表一种新的、未被充分认识的B细胞淋巴瘤亚型。

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系具有一些独特的生物学特性。首先，它是一种非肿瘤性细胞系，这意味着它并不具有肿瘤细胞的恶性特性。其次，该细胞系具有自我更新和分化能力，可以产生具有不同功能的子代细胞。此外，KARPAS-422细胞系还表达多种与B细胞分化相关的表面标记物，如CD19、CD20和膜免疫球蛋白。

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系在淋巴瘤研究领域具有重要价值。它是一种理想的研究模型，可用于研究B细胞淋巴瘤的发病机制、药物筛选和免疫治疗等方面的研究。此外，KARPAS-422细胞系还可以用于开发新型的免疫疗法和疫苗，以治疗和预防B细胞淋巴瘤。

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞培养操作

1)复苏KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系可以用于CIK细胞与DC共培养抗B细胞淋巴瘤作用研究

探讨健康人群DC-CIK细胞对不同B-NHL细胞的杀伤活性。为异体DC-CIK细胞免疫治疗更好的应用于临床做准备。

方法1.抽取健康志愿者或B-NHL患者外周血50ml,常规单个核细胞提取法分离提取单个核细胞,于37℃、5%C02、饱和湿度培养箱中孵育2h；收集贴壁细胞用于诱导培养DC,非贴壁细胞诱导培养CIK细胞,分别培养9d；将成熟DC与CIK细胞混合培养6d,以单纯CIK细胞作为对照组。

2. 用倒置显微镜观察KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞形态变化；细胞计数仪采用台盼蓝染色法计数。

3. 采用流式细胞仪于培养第9d检测DC细胞免疫表型；于第12d、15d检测CIK细胞及DC与CIK细胞共培养细胞免疫表型。

4. 于培养第15d收集培养细胞上清液,采用ELISA法检测IFN-γ、IL-12和TNF-α细胞因子分泌量。

5. 采用MTT比色法检测效靶细胞比5：1、10：1、20：1条件下,CIK细胞、DC-CIK细胞对B-NHL细胞的杀伤活性。

结果1.CIK细胞与DC共培养后,其增殖活性和杀伤活性显著增强。共培养细胞组CD3+CD8+和CD3+CD56+双阳性细胞比例、细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12分泌量均明显高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义。

2. 健康人群和NHL患者相比,细胞培养第15d DC-CIK细胞数量、CD3+CD8+和CD3+CD56+双阳性细胞比例、细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12分泌量均明显增加。2组细胞对KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞均显示出较强的杀伤活性,在同一效靶比条件下,健康人群组DC-CIK细胞抗肿瘤作用明显优于NHL患者组。

3. 健康人群DC-CIK细胞对不同B-NHL细胞(SU-DHL4细胞、KARPAS-422人类B细胞淋巴瘤悬浮细胞系细胞、KARPAS422细胞)均有较强细胞毒作用,且随效靶比增加杀伤作用增强。

结论：CIK细胞与DC共培养后,其增殖活性和杀伤活性显著提高。与NHL患者相比,细胞培养第15d健康人群DC-CIK细胞抗肿瘤作用明显增强,且健康人群DC-CIK细胞对不同非霍奇金淋巴瘤细胞均有细胞毒作用。

参考文献

[1]Anti-inflammatory therapies in cancer cachexia.Josep M.Argilés;;Sílvia Busquets;;Francisco J.López-Soriano.European Journal of Pharmacology,2011

[2]Qualitative and quantitative differences in the intensity of Fas-mediated intracellular signals determine life and death in T cells.Min-Jung Shin;;Jae-Hyuck Shim;;Jae-Young Lee;;Wook-Jin Chae;;Heung-Kyu Lee;;Tomohiro Morio;;Jun Han Park;;Eun-Ju Chang;;Sang-Kyou Lee.International Journal of Hematology,2010

[3]A randomized,controlled trial of postoperative adjuvant cytokine-induced killer cells immunotherapy after radical resection of hepatocellular carcinoma.Dong Hui;;Li Qiang;;Wang Jian;;Zhang Ti;;Kong Da-Lu.Digestive and Liver Disease,2009

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[5]刘小兰.CIK细胞与DC共培养抗B细胞淋巴瘤作用研究[D].山西医科大学,2014.