蛋白琥珀酸铁的一种制备方法

背景技术

铁元素是人体必需微量元素之一，正常成年人体内铁含量高达0.004%，存在于多个组织和器官中，参与人体氧的运输贮存和一系列生理生化反应等，对人体有非常重要的意义。据世界卫生组织报道，全球约有30%的人口患有因缺铁而导致的不同程度的并发症，其中缺铁性贫血是最常见的一种。

蛋白琥珀酸铁是目前较为理想的补铁产品，属于多肽类蛋白补铁剂，是酪蛋白经丁二酸酐酰化后和三氯化铁络合后制得的产物；呈红棕色粉末，无特别气味，其在碱性环境溶解，在酸性环境析出，在水、0.1mol/L 盐酸、乙醇、氯仿中不溶，因此，其不被胃蛋白酶消化，在中性pH值时可被胰蛋白酶水解。有研究表明，在酪蛋白修饰过程中，琥珀酰化促进酪蛋白结构展开，增加四级亚基结构的解离，改变了酪蛋白的构象，并暴露了之前埋藏的氨基，使酪蛋白的结合位点增加，酰化后的酪蛋白铁结合能力显著增强且稳定性较高。因此， 在蛋白琥珀酸铁制备过程中酪蛋白酰化是关键步骤。

专利CN201910222997.8提供了一种高载铁量的蛋白琥珀酸铁的制备方法，向酪蛋白溶液中加入蛋白质展开剂，使得琥珀酸接枝率提高，三价铁的络合率提高，从而提高蛋白琥珀酸铁的载铁量，增加铁的生物利用度，同时专利CN202011491159.X提供了一种蛋白琥 珀酸铁口服液及其制备方法，通过控制蛋白琥珀酸铁的分子量范围3000‑5000kDa，配合外加剂提高其稳定性，有效缓解了服用蛋白琥珀酸铁后的便秘问题；又如专利CN202110672237.4提供了一种蛋白琥珀酸铁肠溶胶囊及其制备的方法，通过选择明胶、尤特奇L100、甘油等合适的辅料，使得蛋白琥珀酸铁可以在肠道中释放，顺应性好。虽然上述几种解决了蛋白琥珀酸铁的载铁量、稳定性、顺应性等问题，但仍存在酪蛋白酰化程度低， 制备的蛋白琥珀酸铁的铁螯合率不高等问题。

制备方法

⑴牦牛乳酪蛋白加水溶解，并用4mol/L NaOH调节pH至8~10，得到0.2~1g/mL的酪蛋白溶液。

⑵酰化改性：将丁二酸酐按1:1~1:5的质量比（g/g）加入到所述酪蛋白溶液中，丁二酸酐投入次数1~5次/小时，用4mol/L NaOH调节pH值至8~10，反应温度控制在35~55℃，加完后继续搅拌30~50min，离心过滤，所得滤液用3mol/L HCl调节pH值至2.0后使琥珀酸蛋白沉淀，再经离心分离、洗涤沉淀，所得沉淀加水，并用4mol/L NaOH调节pH值至9.0，待沉淀完全溶解后离心，即得琥珀酸蛋白溶液。

⑶络合反应：将质量浓度为1.85 %的三氯化铁溶液缓慢加入琥珀酸蛋白溶液中，琥珀酸蛋白溶液中的琥珀酸蛋白与三氯化铁溶液中的三氯化铁的重量比（g/g）为1：0.28；同时用4mol/LNaOH调节pH值至9.0，直至沉淀完全后停止加入三氯化铁溶液，持续搅拌30min，经离心过滤，即得蛋白琥珀酸铁的滤液。

⑷冷冻干燥：将蛋白琥珀酸铁滤液在速率为3500r/min、时间15min的条件下反复沉淀离心过滤后，所得滤液放入冷冻干燥机中，于‑50 ℃以下干燥20~26h，即得蛋白琥珀酸铁。

参考文献

[1]甘肃农业大学. 一种蛋白琥珀酸铁的制备方法及结构表征的方法:CN202310011988.0[P]. 2023-04-07.