RIP试剂盒

背景^[1-7]

RIP试剂盒是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBPs（RNA结合蛋白）的互作关系等。用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，防止非特异性的RNA的结合。IP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA结合蛋白免疫沉淀）主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或者测序分析。

RIP是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可以帮助我们发现miRNA的调节靶点。免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来，RNA序列通过Microarray（RIP-chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。RIP是一种基于抗体的技术，用于定位体内的RNA-蛋白质相互作用。

将所关注的RNA结合蛋白(RBP)与其结合的RNA一起进行免疫沉淀，鉴定结合转录RNA（mRNA、非编码RNA或病毒RNA）。可以通过实时PCR、微阵列或测序检测。最近，表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注大大增加。据观察，RNA的功能远不止转录和后续的翻译。例如，RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展，使研究人员能够定位RNA-蛋白质相互作用。RIP是一种研究单个蛋白质和RNA分子间物理结合的实验方案。

实验步骤：

1.收集细胞（使用甲醛选择性处理细胞，体内交联蛋白质-RNA复合物）

2.分离细胞核，裂解细胞核沉淀

3.染色质片段化

4.将所关注的RNA结合蛋白(RBP)和结合的RNA一起进行免疫沉淀

5.洗去未结合的物质

6.纯化免疫沉淀后RBP上结合的RNA

7.将RNA逆转录为cDNA，通过qPCR、微阵列或测序进行分析

产品优势：

1.方便，快速，易于操作。

2.提供优化的磁珠，适于沉淀RNA-蛋白复合物。

3.高品质，稳定性好。

4.结果重复率高。

5.操作简单、耗时短、结果客观准确。

应用^[8]

RIP试剂盒可用于转录后调控研究、表观遗传调控以及炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路、免疫学研究。

例如在RIP、c-FLIP基因在肝癌中的表达意义及其在TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中作用研究中用免疫组化法对实验组及对照组中c-FLIP和RIP蛋白的表达情况进行检测。分析RIP和c-FLIP在肝癌组织中的表达与肿瘤的病理学分级和患者临床分期及复发远处转移之间的相关性。

参考文献

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[3]Survival Function of the FADD-CASPASE-8-cFLIP L Complex[J].Christopher P.Dillon,Andrew Oberst,Ricardo Weinlich,Laura J.Janke,Tae-Bong Kang,Tehila Ben-Moshe,Tak W.Mak,David Wallach,Douglas R.Green.Cell Reports.2012(5)

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[7]cIAPs Block Ripoptosome Formation,a RIP1/Caspase-8 Containing Intracellular Cell Death Complex Differentially Regulated by cFLIP Isoforms[J].Molecular Cell.2011(3)

[8]孙吉春.RIP、c-FLIP基因在肝癌中的表达意义及其在TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用[D].中南大学,2013.